[發明專利]一種針對疾病個體化用藥的基因分型快速試紙條檢測方法

有效

• 申請號: 201210171346.9
• 申請日: 2012-05-29
• 公開（公告）號: CN102776279A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發明（設計）人: 張秦魯;魏旭旭;朱娟莉;惠文利;崔亞麗
• 申請（專利權）人: 西安金磁納米生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 西安智邦專利商標代理有限公司 61211
• 代理人: 陳廣民

1.一種針對疾病個體化用藥的基因分型快速試紙條檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)針對待檢測樣本基因組DNA的CYP2C19*2（681G>A）、CYP2C19*3（636G>A）、CYP2C19*17（-806C>T）這三個SNP位點，對每一個SNP位點均設計一條野生型特異性引物、一條突變型特異性引物和一條共用引物進行識別與擴增；在野生型特異性引物和突變型特異性引物的5′端均標記地高辛，共用引物的5′端標記生物素；

(2)針對一個SNP位點，平行做兩管PCR反應，其中一管加入共用引物與等量的突變型特異性引物，另一管中加入共用引物與等量的野生型特異性引物，兩管的PCR反應條件相同并同時置于PCR儀中反應；這樣，對于（1）步驟中所述的三個SNP位點，共做六管PCR反應；Taq聚合酶的特異性決定了PCR反應能否順利進行；

(3)利用鏈親和素金磁微粒特有的可目視化特性，采用層析技術并以生物素和鏈親和素作用，對步驟(2)得到的擴增產物中SNP基因型完成分型檢測；

其中，層析技術采用的試紙條滿足：

a、試劑條的免疫層析膜上的質控線處包被有質控用生物素；

b、檢測線處包被有捕獲用抗地高辛抗體；

c、結合墊上噴涂有鏈親和素金磁微粒；

經步驟(2)取出的兩管PCR產物分別滴至兩支試紙條的樣品墊上進行檢測，質控線顯色表明此次實驗有效，即步驟(2)的該管PCR反應順利，即得到的產物一端標記有生物素，另一端標記有地高辛，滴加至上樣墊，一端的生物素與鏈親和素磁粒特異性結合之后，通過層析作用上移至檢測線處，另一端上的地高辛與檢測線上的抗地高辛抗體特異性結合顯色，由此判斷出其基因型：

滴加含有野生型特異性引物的PCR產物在試紙條的檢測線上顯色，而含有突變型特異性引物的PCR產物在試紙條的檢測線上不顯色，則表明基因型為野生型；反之基因型為突變型；若兩支試紙條的檢測線均顯色，則表明基因型為雜合型。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中設計的引物序列如下：

CYP2C19*2（681G>A）引物序列：

??引物名稱??序列??CYP2C19*2F：??5′Biotin-ACAACCAGAGCTTGGCATATTGT-3′??CYP2C19*2R(M)：??5′Dig-GGTTTTTAAGTAATTTGTTATGGGTTGCT-3′??CYP2C19*2R(Wt)：??5′Dig-TTTTTAAGTAATTTGTTATGGGTTGCC-3′

CYP2C19*3（636G>A）引物序列：

??引物名稱??序列??CYP2C19*3F：??5′Biotin-TGTGCTCCCTGCAATGTGAT-3′??CYP2C19*3R(M)：??5′Dig-AAAAAACTTGGCCTTACCTGGAAT-3′??CYP2C19*3R(Wt)：??5′Dig-AAAAACTTGGCCTTACCTGGAAC-3′

CYP2C19*17（-806C>T）引物序列：

??引物名稱??序列??CYP2C19*17F(M)：??5’Dig-ATTTGTGTCTTCTGTTCTCAAATT-3’??CYP2C19*17F(Wt)：??5’Dig-ATTTGTGTCTTCTGTTCTCAAACC-3’??CYP2C19*17R：??5’Biotin-CTGGGATTTGAGCTGAGGTCTT-3’