[發明專利]一株產甘草苷的甘草內生真菌

有效

• 申請號: 201210171187.2
• 申請日: 2012-05-29
• 公開（公告）號: CN102676405A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 鄭春英;孔德崴;白長勝;孫雅北;譚佳音
• 申請（專利權）人: 黑龍江大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 金永煥

技術領域

本發明涉及一株內生真菌。

背景技術

甘草為烏拉爾甘草(G.uralensis?Fisch)，脹果甘草(G.inflate?Bat)和光果甘草(G.glabra?L)的干燥根和根莖，國家二級保護植物。甘草是一種補益中草藥，具有很多生理活性，如抗癌、抗變態、抑制SARS病毒以及抑制艾滋病毒等特殊功效。其主要成分甘草苷是一種黃酮類成分，具有解痙、抗潰瘍、抑制酪氨酸酶活性、清除氧自由基的功效，還有抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌等作用。實驗研究表明，植物與內生真菌在相互作用的過程中，有內生真菌能產生與植物相同或相似的活性物質，因此從藥用植物中分離到產生活性物質的內生真菌已成為當今學者的研究趨勢。

發明內容

本發明提供了一株產甘草苷的甘草內生真菌。

本發明產甘草苷的甘草內生真菌，它為枝頂孢菌(Acremonium?dichromosporum)RP4，已在中國典型培養物保藏中心保藏，保藏編號為CCTCC?No：M?2012048，保藏地址為武漢市武漢大學，保藏日期為2012年2月29日；它在PDA固體培養基上培養7d后，菌落直徑為3～5cm，中心凸起，菌落為深綠色，基質為灰綠色，易生深綠色孢子，菌落邊緣整齊呈白色，緊貼培養基，分生孢子聚成繩索狀的菌索，分生孢子梗直立，錐形，直接長在菌絲細胞上，基部附近偶分枝，有隔膜，分生孢子單生，單細胞。

本發明產甘草苷的甘草內生真菌，它為枝頂孢菌(Acremonium?dichromosporum)RP4，其ITS序列提交至NCBI網頁，通過Blast搜索與所得到的序列相似性高的序列，并通過所構建系統進化樹，內生真菌RP4的ITS序列與(Acremonium?dichromosporum，編號AB540572.1)菌株的相似性都達到了98％以上，結合形態學觀察結果，確定內生真菌RP4為枝頂孢菌(Acremonium?dichromosporum)。

本發明產甘草苷的甘草內生真菌，它為枝頂孢菌(Acremonium?dichromosporum)RP4，已在中國典型培養物保藏中心保藏，保藏編號為CCTCC?No：M?2012048，保藏地址為武漢市武漢大學，保藏日期為2012年2月29日。

本發明利用微生物制藥手段提取分離野生甘草健康植株的內生真菌，以抑菌活性為指標，采用濾紙片法進行抑菌實驗，篩選得到抑菌活性較強的RP4，采用HPLC法為分析甘草內生真菌RP4的發酵液，結果在內生真菌RP4的發酵液中發現含有甘草苷，說明內生真菌RP4為產甘草苷的內生真菌。最后將獲得的RP4菌株通過形態學觀察和18S?rDNA序列分析鑒定其種屬。

本發明甘草內生真菌RP4為枝頂孢菌(Acremonium?dichromosporum)，其代謝物具有較好的抑菌活性，同時從其代謝物中發現其含有甘草苷，本發明對采用甘草內生真菌RP4生產甘草苷具有指導意義。

附圖說明

圖1為具體實施方式一中枝頂孢菌(Acremonium?dichromosporum)RP4的菌落形態圖；

圖2為具體實施方式一中枝頂孢菌(Acremonium?dichromosporum)RP4的孢子顯微結構圖；

圖3為具體實施方式一中枝頂孢菌(Acremonium?dichromosporum)RP4基因組DNA的電泳圖，其中M泳道表示Marker，G泳道表示RP4；

圖4為具體實施方式一中枝頂孢菌(Acremonium?dichromosporum)RP4的PCR擴增產物的電泳圖，其中M泳道表示Marker，G泳道表示RP4；

圖5為具體實施方式一中枝頂孢菌(Acremonium?dichromosporum)RP4的系統進化樹；

圖6為具體實施方式一中甘草苷對照品的HPLC色譜圖，其中a表示甘草苷；

圖7為具體實施方式一中供試品RP4的HPLC色譜圖，其中a表示甘草苷；

圖8為具體實施方式一中加入對照品后供試品RP4的HPLC色譜圖，其中a表示甘草苷；

圖9為具體實施方式一中空白對照品的HPLC色譜圖。

具體實施方式

具體實施方式一：本實施方式產甘草苷的甘草內生真菌，它為枝頂孢菌(Acremonium?dichromosporum)RP4，已在中國典型培養物保藏中心保藏，保藏編號為CCTCC?No：M2012048，保藏地址為武漢市武漢大學，保藏日期為2012年2月29日。