[發明專利]檢測PJVK基因c.887G>A突變的試劑盒

無效

• 申請號: 201210170758.0
• 申請日: 2012-05-29
• 公開（公告）號: CN102747146A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 王秋菊
• 申請（專利權）人: 王秋菊;中國人民解放軍總醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006
• 代理人: 黃韌敏

技術領域

本發明涉及基因檢測領域，具體涉及用于檢測PJVK基因突變基因的試劑盒；本發明還涉及PJVK突變基因及其在診斷和/或治療感音神經性聾及聽神經病/聽神經病譜系障礙中的應用。

背景技術

聽神經病/聽神經病譜系障礙(Auditory?Neuropathy?Spectrum?Disorders,ANSD)是一種耳蝸外毛細胞功能正常，但聲音信號不能同步地從內耳傳輸到大腦的聽覺障礙性疾病，系聽覺信息傳輸處理過程的異常。聽力學檢查表現為以低頻聽力減退為主的聽力損失，聽性腦干反應不能引出，耳蝸微音電位和耳聲發射多正常。該類疾病于上個世紀90年代被定義和命名，是一種新認識的聽力障礙性疾病，在高危嬰幼兒中的發病率約為0.23%,在各種原因所致的ABR異常的聾病患兒中發病率則高達11%,是導致嬰幼兒和青少年言語交流障礙的重要聽力障礙性疾病之一。然而，其病因、病變部位和發病機制尚不十分明確，導致藥物治療、佩戴助聽器及人工耳蝸植入術效果的預測和評估上存在難度。近幾年來，一系列感音神經性聾及聽神經病/聽神經病譜系障礙相關基因的發現，從分子水平揭示了感音神經性聾及聽神經病/聽神經病譜系障礙的病理機制。根據不同基因導致的不同病變部位對感音神經性聾及聽神經病/聽神經病譜系障礙進行分型，可為感音神經性聾及聽神經病/聽神經病譜系障礙的臨床治療提供理論依據。

Starr教授等根據聽神經病譜系障礙發病部位的不同將其分為TYPE?I型（病變部位在聽神經）和TYPE?II型（病變部位在內毛細胞、末梢樹突及突觸）國內外研究顯示攜帶OTOF基因突變的聽神經病譜系障礙患者臨床多以TypeII型表現為主，適合于人工耳蝸植入并可取得較好效果。而攜帶PJVK基因突變的聽神經病譜系障礙患者臨床多以TYPE?I型為主，其病變部位在聽神經，位置深在，人工耳蝸植入術效果欠佳。

PJVK基因是與非綜合征型隱性遺傳性感音神經性聾及聽神經病/聽神經病譜系障礙相關的基因。由Del?maghani等于2006年首次發現并命名,也稱為DFNB59基因,位于染色體2q31.1～2q31.3區域,DNA序列全長9800bp,含有7個外顯子,其中第一個外顯子為非編碼外顯子。該基因的編碼區序列，含終止密碼子如SEQ?ID?NO.1所示，編碼由352個氨基酸組成的蛋白pejvakin（如SEQ?ID?NO.2所示）,其中第249～258位氨基酸形成核定位信號基序(nuclear?localization?signal，NLS)，第305～331位氨基酸形成一種可以與DNA相互作用的鋅指結構(zinc-binding?domains)。Pejvakin蛋白主要表達于耳蝸Corti器、螺旋神經節細胞以及前三級聽覺傳入通路(耳蝸核、上橄欖復合體、下丘)的神經元細胞中，所致感音神經性聾及聽神經病/聽神經病譜系障礙的病變部位主要位于聽覺傳導通路，影響動作電位的傳導及細胞內物質交換。自2006年首次發現并報道PJVK基因至今,學者們分別在伊朗、摩洛哥、土耳其及荷蘭等患者中發現了該基因的10余種突變，但少見我國感音神經性聾及聽神經病/聽神經病譜系障礙患者該基因的突變報道。申請人所在課題組針對150名感音神經性聾及聽神經病/聽神經病譜系障礙患者率先開展了該基因的篩查，并發現我國人群特有的c.887G>A突變，進而研發了檢測該基因c.887G>A突變的試劑盒。該成果有助于快速、高效地在更大范圍的感音神經性聾及聽神經病/聽神經病譜系障礙人群中進行突變位點的檢測，進而對其定位分型，為感音神經性聾及聽神經病/聽神經病譜系障礙患者開展臨床干預提供重要的指導意義。

發明內容

本發明的一個目的在于提供用于檢測PJVK突變c.887G>A基因的試劑盒，其技術方案為：

一種用于檢測與感音神經性聾及聽神經病/聽神經病譜系障礙相關的位于PJVK基因的c.887G>A突變的試劑盒，所述試劑盒包括：

從待測樣品中提取DNA的試劑；

用于擴增樣本DNA的PCR反應試劑；

對PCR擴增產物進行測序的試劑；

其中，所述擴增樣本DNA的PCR反應試劑包括PCR引物，所述PCR引物擴增的目標片段包含PJVK基因第887位堿基。

具體地，上述PCR引物為選自：

PJVK-7F-1（SEQ?ID?NO.3）:5’-GCCAGACCCTGTCTCAAAAA-3’，

PJVK-7R-1（SEQ?ID?NO.4）:5’-GGGAATATGATACCCAGACAGG-3’；