[發明專利]一種米曲霉分泌木質素制備過氧化物酶的方法

有效

• 申請號: 201210169793.0
• 申請日: 2012-05-29
• 公開（公告）號: CN103451161A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 張志才;陳鈞;任曉鋒;李佳少;黃達明
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12N9/08
• 分類號: C12N9/08;C12R1/69
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

1.一種米曲霉分泌木質素制備過氧化物酶的方法，其特征在于按照下述步驟進行：以米曲霉為出發菌株，進行試管擴大培養、液體搖瓶培養、一級種子培養和固體發酵培養，得到含有木質素過氧化物酶的米曲霉固體發酵物,然后進行提取得到含有木質素過氧化物酶粗品。

2.根據權利要求1所述的一種米曲霉分泌木質素制備過氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的菌種是任何一種米曲霉菌種，如中國普通微生物菌種保藏管理中心（CCGMC）、中國農業微生物菌種保藏管理中心(ACCC)、中國工業微生物菌種保藏管理中心?(CICC)、中國醫學微生物菌種保藏管理中心(CMCC)、國家獸醫微生物菌種保藏中心?(CVCC)和抗生素菌種保藏管理中心等等保藏的菌種。

3.根據權利要求1所述的一種米曲霉分泌木質素制備過氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的含有木質素的農作物秸稈原料是任意一種秸稈，如玉米秸稈、稻草秸稈、麥秸稈、高粱秸稈、大豆秸稈、棉花秸稈等等所有含有木質素的農作物秸稈，秸稈首先經過粉碎，過20～100目的篩。

4.根據權利要求1所述的一種米曲霉分泌木質素制備過氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的試管擴大培養工藝中，其擴大培養基為馬鈴薯蔗糖培養基。

5.根據權利要求1所述的一種米曲霉分泌木質素制備過氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的液體搖瓶培養和一級種子培養的培養基均為：葡萄糖5～30克，酒石酸銨0.1～5克，苯甲醇0.2～3克，硫酸鎂0.2～1克，吐溫80?0.5～10克，磷酸二氫鉀2～9克，鄰苯二甲酸3～18克，加水定容到1升，pH?5～8克，120～140℃滅菌20～40分鐘。

6.根據權利要求1所述的一種米曲霉分泌木質素制備過氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的搖瓶培養工藝條件為，接種一環米曲霉試管斜面孢子于裝有體積比16～48%培養基的三角瓶中，在轉速：150轉/分，25～35℃，培養24～72小時；在進行搖瓶培養之前，首先將米曲霉菌種接入新配置的馬鈴薯蔗糖培養基中進行培養，培養溫度25～35℃，培養時間48～144小時；4～10℃保存備用。

7.根據權利要求1所述的一種米曲霉分泌木質素制備過氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的一級種子培養工藝為，按1～20%（體積比）的接種量將搖瓶培養種子液接種到一級種子培養基中，在溫度25～35℃，攪拌轉速50～200轉/分，通氣量0.2～2：1體積/體積/每分鐘（通氣氣體體積/發酵液體積/每分鐘），培養18～72小時。

8.根據權利要求1所述的一種米曲霉分泌木質素制備過氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的固體發酵培養中固體發酵培養基組成為：秸稈10千克，水20～60千克，葡萄糖0.5～3千克，黃豆餅粉0.5～2千克；硫酸銅5～15克，硫酸亞鐵5～15克，硫酸錳5～20克，該培養基各成分可以按此比例放大。

9.根據權利要求1所述的一種米曲霉分泌木質素制備過氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的發酵工藝為：按2～20%（種子液體積/發酵培養基重量），培養料厚度為0.1～0.4米，料寬0.5～2米，長度不限，通氣量為0.3～1.5：1（氣體體積/發酵培養基重量）/每分鐘，培養時間為3天～23天，中途翻料1～2次。

10.根據權利要求1所述的一種米曲霉分泌木質素制備過氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的生產木質素過氧化物酶粗品的工藝，將上述的固態發酵物粉碎，過20～100目篩，粉碎的發酵培養物與水按1：10～50比例混合，50～300轉/分鐘攪拌，5～10℃提取4～8小時，抽濾，濾渣用10～50倍的水混合，50～300轉/分鐘攪拌，5～10℃提取4～8小時，抽濾，兩次濾液合并，通過分子量5000～10000的膜截留濃縮50～100倍，-20℃冷凍干燥，得到酶制劑粗品，由此工藝得到的酶制劑粗品，色質白色至褐色，木質素過氧化物酶活性可達到900～8000U/g干粗品。