[發明專利]一種海洋廣鹽性綠藻分離淡化培養方法

有效

• 申請號: 201210169713.1
• 申請日: 2012-05-29
• 公開（公告）號: CN103451102B
• 公開（公告）日: 2017-09-05
• 發明（設計）人: 張善發;汪光義;邵聰;劉英
• 申請（專利權）人: 北京大學深圳研究生院
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12
• 代理公司: 深圳市銘粵知識產權代理有限公司44304
• 代理人: 孫偉峰

技術領域

本發明涉及到微藻的技術領域，具體說是一種用于廣鹽性綠藻快速分離篩選及淡化的培養方法。

技術背景

微藻是一種分布廣、生長快微型光合水生生物，其光能利用率比大田作物高幾倍到幾十倍，可以利用微藻開發各種食品、化學藥品及人類健康的生物活性物質等各種產品，如胡蘿卜素、蝦青素、藻膽素、脂肪酸、多糖類、維生素、乙醇和生物柴油等產品。以上各種產品極具有經濟價值。

鑒于以上藻類的優良特點及較高的商業價值，以此對藻類的應用和選擇具有重要意義，優良藻種的選擇顯得更為重要。優良的藻種首先要具備生長快、適應性強、所需活性物質含量較高。鹽度的廣泛適應性是微藻適應性強和商業化的重要指標之一，現有幾種商業化的藻類(如鹽藻,雨生紅球藻)皆滿足生長速度快和所需活性物質含量較高，但對于鹽度的適應性較差，在培養過程中極易因鹽度的變化而導致培養失敗；海洋中含有豐富的微藻種質資源，為從海洋中選擇廣鹽性微藻提供了有利條件，現有技術首先將微藻分離后用海水培養，然后通過逐步加淡水的方式淡化，用時較長，效率較低且操作盲目性較大，不適合大量篩選廣鹽性藻類。

發明內容

本發明的目的在于提供一種海洋廣鹽性綠藻快速分離篩選及淡化的培養方法，它可豐富現有廣鹽性藻的種類及淡化方法。

為了實現上述目的，本發明的技術方案是：一種海洋廣鹽性綠藻分離淡化培養方法，其特征在于：所述的海洋廣鹽性綠藻分離淡化方法包括如下步驟：a、采集的海水為海灣內或入海口處，將采集的海水用蒸餾水稀釋10后后直接涂布于蒸餾水配制的瓊脂培養基上，在20-28度，光照1000-4000Lux的條件下根據單藻落得生長速度培育7-20天，直到單藻落達到1mm左右的時候再進行轉培養；b、將上述達到1mm左右的的單藻落用牙簽或者接種環轉移到新的蒸餾水配制的瓊脂培養基上，通過劃線方法進一步將藻類純化，在20-28度光照1000-4000Lux的情況下培養7-20天；c、將上述瓊脂培養基上生長良好的菌落再次接入蒸餾水配制的液體培養基培養，培養10天左右，生長出來的微藻就實現分離與淡化的效果。

我們用這種方法分離并淡化了大約30種海洋綠藻，30種海洋綠藻的成功分離及淡化培養的實驗表明，此方法是一種有效的，效率高的方法，適合于海洋廣鹽性藻類分離、淡化、篩選，有較高的應用價值，為篩選廣適應性的藻類提供了有效的方法。

附圖說明

圖1為海水稀釋后直接涂板的藻類菌落生長效果圖。

圖2為轉移劃線培養后的藻類實體生長效果圖。

圖3為分離純化后的微藻在淡水液體培養基內的生長效果圖。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明做進一步的描述。

本發明一種海洋廣鹽性綠藻快速分離篩選及淡化的培養方法，其特征在于：所述的一種海洋廣鹽性綠藻快速分離篩選及淡化的培養方法包括如下步驟：a、將從海洋中采集的水樣用蒸餾水稀釋直接涂布于蒸餾水配制的瓊脂培養皿上，每個培養皿含有瓊脂培養及15-40ml。其瓊脂培養基組成如下：溶液20ml包含K₂HPO₄0.02g；MgSO₄.7H₂O 0.02g；KNO₃0.2g；土壤抽提液100ml，瓊脂0.96-1.5g，其中土壤抽提液的制備方法：土壤取出一些雜物等在空氣中風干用2-4mm的篩子過濾，加入兩倍體積的蒸餾水高壓滅菌15分鐘用whatman No.1過濾后方可使用；所述土壤取自無污染、無施肥的、無噴灑化學藥物的樹林內土壤；b、將上述培養出的單菌落轉移到新的瓊脂培養基上通過劃線方法進一步純化；c、將上述劃線純化的單藻落接入液體培養基內培養，其液體培養基的組成如下：溶液20ml包含K₂HPO₄0.02g；MgSO₄.7H₂O 0.02g；KNO₃0.2g；土壤抽提液100ml，a步驟中將海水水樣用10倍的蒸餾水稀釋，取水樣0.1-1ml直接涂與瓊脂培養基上，放在溫度20-28光照1000-4000Lux的環境下進行培養7-20天,a步驟和b步驟中瓊脂培養是15-40ml,是液體培養加入0.8％-1.5％的瓊脂后在121度滅菌20分鐘后分裝到各個培養皿內，用無菌封口膜密封備用，c、步驟中液體培養基是用蒸餾水配置好在121度高壓滅菌20分鐘后冷卻備用，液體培養基體積為100ml。

實施例1一種海洋廣鹽性綠藻快速分離篩選及淡化的培養方法。