[發明專利]一種3-羥基丁酸和3-羥基戊酸共聚物的合成方法

有效

• 申請號: 201210167714.2
• 申請日: 2012-05-25
• 公開（公告）號: CN102660592A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發明（設計）人: 何寧;陳榮輝;李清彪;王遠鵬;彭雅娟;黃耀華
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12P7/62
• 分類號: C12P7/62;C12R1/01
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所 35200
• 代理人: 馬應森

1.一種3-羥基丁酸和3-羥基戊酸共聚物的合成方法，其特征在于包括以下步驟：

1）3-羥基丁酸和3-羥基戊酸共聚物的發酵合成

將新鮮斜面上的菌苔轉接至種子培養基培養后，轉接至發酵培養基培養，得到積累了3-羥基丁酸和3-羥基戊酸共聚物的發酵液；

2）真養產堿桿菌的菌體收集

將步驟1）得到的發酵液離心，棄去上清液，所得沉淀即為真養產堿桿菌的菌體；

3）3-羥基丁酸和3-羥基戊酸共聚物的提取

將步驟2）得到的真養產堿桿菌的菌體冷凍，加入丙酮，離心后棄上清液，將沉淀洗滌后與EDTA溶液和次氯酸鈉混合，反應后的混合液離心，棄去上清液，再將沉淀洗滌后干燥，即得到3-羥基丁酸和3-羥基戊酸共聚物。

2.如權利要求1所述的一種3-羥基丁酸和3-羥基戊酸共聚物的合成方法，其特征在于在步驟1）中，所述種子培養基由以下配比的原料組成：牛肉膏10g/L，胰蛋白胨10g/L，酵母粉2g/L，蒸餾水定容，pH?7。

3.如權利要求1所述的一種3-羥基丁酸和3-羥基戊酸共聚物的合成方法，其特征在于在步驟1）中，所述種子培養基培養的條件為：培養溫度為30℃，搖床轉速為200r/min，培養時間為16～24h。

4.如權利要求1所述的一種3-羥基丁酸和3-羥基戊酸共聚物的合成方法，其特征在于在步驟1）中，所述發酵培養基由以下配比原料組成：葡萄糖20～30g/L，乙酰丙酸2～6g/L，酪蛋白胨1～3g/L，Na₂HPO₄·12H₂O?3g/L，KH₂PO₄?0.5g/L，NH₄Cl?0.5g/L，MgSO₄·7H₂O?0.1g/L，檸檬酸鐵銨0.0012g/L，微量元素液10mL/L，蒸餾水定容，pH?6～8。

5.如權利要求4所述的一種3-羥基丁酸和3-羥基戊酸共聚物的合成方法，其特征在于所述微量元素液由以下配比原料組成：ZnSO₄·7H₂O?10mg/L，MnCl₂·4H₂O?3mg/L，H₃BO₃30mg/L，CoCl₂·6H₂O?20mg/L，CuCl₂·6H₂O?1mg/L，NiCl₂·6H₂O?2mg/L，NaMoO₄·2H₂O?3mg/L，蒸餾水定容。

6.如權利要求1所述的一種3-羥基丁酸和3-羥基戊酸共聚物的合成方法，其特征在于在步驟1）中，所述發酵培養基培養的接種量按體積百分比計算為發酵培養基的5%～20%，所述發酵培養基培養的條件可為：培養溫度為28～32℃，搖床轉速為200r/min，培養時間為70～75h。

7.如權利要求1所述的一種3-羥基丁酸和3-羥基戊酸共聚物的合成方法，其特征在于在步驟2）中，所述離心的轉速為10000～12000r/min，離心的時間為5～10min。

8.如權利要求1所述的一種3-羥基丁酸和3-羥基戊酸共聚物的合成方法，其特征在于在步驟3）中，所述冷凍的條件于-20℃下冷凍24h；所述離心的轉速可為10000～12000r/min，離心的時間可為5～10min；所述洗滌，可采用去離子水洗滌2次。

9.如權利要求1所述的一種3-羥基丁酸和3-羥基戊酸共聚物的合成方法，其特征在于在步驟3）中，所述EDTA溶液的加入量按體積百分比為發酵液的30%～35%，所述次氯酸鈉的加入量按體積百分比為發酵液的30%～35%。

10.如權利要求1所述的一種3-羥基丁酸和3-羥基戊酸共聚物的合成方法，其特征在于在步驟3）中，所述反應的條件為70℃下攪拌反應60min；所述再將沉淀洗滌，采用去離子水洗滌2次；所述干燥，可于真空干燥箱中60℃干燥12h。