[發(fā)明專利]抗HIV基因工程重組病毒及其制備方法及抗HIV基因工程藥物

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210166678.8
• 申請日: 2012-05-25
• 公開（公告）號: CN102690792A
• 公開（公告）日: 2012-09-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周兆平;鄭永唐;易俊波;雷明軍;蘇慶寧
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳大學(xué)
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/85;A61K35/76;A61P31/18
• 代理公司: 深圳市順天達(dá)專利商標(biāo)代理有限公司 44217
• 代理人: 汪麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及抗HIV基因工程病毒，更具體地，涉及抗HIV基因工程重組病毒及其制備方法及抗HIV基因工程藥物。

背景技術(shù)

在HIV病毒的感染過程中，首先是HIV病毒包被膜與靶細(xì)胞的細(xì)胞膜發(fā)生融合。該融合過程主要由包被糖蛋白gp120和跨膜亞基gp41介導(dǎo)。gp120與靶細(xì)胞上的CD4分子和輔助受體(趨化因子受體CCR5或CXCR4等)先后結(jié)合，導(dǎo)致gp41的構(gòu)型發(fā)生改變，形成6股α2螺旋束核心結(jié)構(gòu)，將病毒包被膜與靶細(xì)胞的細(xì)胞膜拉近并發(fā)生融合，完成HIV病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞的感染過程。

上述過程中可看出，HIV病毒造成感染的特點(diǎn)是其對CD4分子具有高度的親嗜性，可選擇性地與CD4分子結(jié)合。目前已經(jīng)出現(xiàn)的一些抗HIV抗體也主要是通過構(gòu)建類似CD4分子的結(jié)合位點(diǎn)優(yōu)先與HIV病毒結(jié)合，從而降低HIV病毒與靶細(xì)胞結(jié)合的可能性。但是單一結(jié)合位點(diǎn)與HIV病毒的特異性結(jié)合作用有限，對HIV病毒的防治效果不明顯。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于，針對現(xiàn)有技術(shù)中的抗HIV抗體與HIV病毒的特異性結(jié)合作用有限、對HIV病毒感染的防治效果不明顯的缺陷，提供一種可與HIV病毒特異性結(jié)合、有效預(yù)防和治療HIV感染的抗HIV基因工程重組病毒及其制備方法及抗HIV基因工程藥物。

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題通過以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)：提供一種抗HIV基因工程重組病毒，所述重組病毒包括人抗體的恒定區(qū)，其中，所述重組病毒還包括與所述人抗體的恒定區(qū)連接的CD4和CCR5。

在上述抗HIV基因工程重組病毒中，所述人抗體的恒定區(qū)為人抗體的重鏈恒定區(qū)和/或人抗體的輕鏈恒定區(qū)。

在上述抗HIV基因工程重組病毒中，所述人抗體的重鏈恒定區(qū)還包括激活人體免疫功能的抗體Fc片段。

在上述抗HIV基因工程重組病毒中，所述CD4和所述CCR5通過柔性連接肽與所述人抗體的重鏈恒定區(qū)柔性連接，所述柔性連接肽具有序列表中的氨基酸序列。

在上述抗HIV基因工程重組病毒中，所述人抗體的恒定區(qū)為IgG抗體的重鏈恒定區(qū)、IgA抗體的恒定區(qū)或IgM抗體的恒定區(qū)。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供一種上述抗HIV基因工程重組病毒的制備方法，其中，所述方法包括以下步驟：

A：分別獲取人抗體的重鏈恒定區(qū)基因、人抗體的輕鏈恒定區(qū)基因、CD4基因和CCR5基因；

B：采用病毒載體構(gòu)建包括所述人抗體的重鏈恒定區(qū)基因、人抗體的輕鏈恒定區(qū)基因、CD4基因和CCR5基因的病毒載體的穿梭質(zhì)粒；

C：選用病毒輔質(zhì)粒，使所述病毒輔質(zhì)粒與步驟B的穿梭質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化產(chǎn)生重組病毒質(zhì)粒；

D：將步驟C中形成的重組病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至細(xì)胞株中進(jìn)行培養(yǎng)，得到重組病毒；

E：離心收集上清或細(xì)胞進(jìn)行純化后得到所述重組病毒。

在上述抗HIV基因工程重組病毒的制備方法中，在步驟A中，所述人抗體的恒定區(qū)基因?yàn)槿丝贵w的輕鏈恒定區(qū)基因與IgG抗體的重鏈恒定區(qū)基因、IgA抗體的重鏈恒定區(qū)基因或IgM抗體的重鏈恒定區(qū)基因。

在上述抗HIV基因工程重組病毒的制備方法中，在步驟B中，所述真核表達(dá)載體包括pShuttle、pAdTrack、pAdTrack-CMV、pdc316、pShuttle-CMV、pLenti、pGC-FU、pLVTHM或pRRL。

在上述抗HIV基因工程重組病毒的制備方法中，在步驟C中，所述病毒輔質(zhì)粒為病毒骨架質(zhì)粒pAdEasy-1；在所述步驟D中，所述表達(dá)細(xì)胞株為293細(xì)胞、AD-293細(xì)胞或中國倉鼠卵巢細(xì)胞。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供一種抗HIV基因工程藥物，所述抗HIV基因工程藥物含有上述抗HIV基因工程重組病毒。

實(shí)施本發(fā)明的技術(shù)方案，可以獲得以下技術(shù)效果：本發(fā)明的重組病毒同時具有可與HIV病毒上的CD4位點(diǎn)和CCR5位點(diǎn)特異性結(jié)合的CD4和CCR5，特異性結(jié)合作用顯著增強(qiáng)，可以實(shí)現(xiàn)雙重阻止HIV病毒感染宿主細(xì)胞的作用；本發(fā)明的制備方法工藝簡單、切實(shí)可行；具有本發(fā)明的重組病毒的抗HIV基因工程藥物可有效作用于HIV病毒，從而有效預(yù)防和治療HIV病毒感染。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。