[發明專利]豬細小病毒BQ-C株及其在制備豬細小病毒滅活疫苗中的應用

有效

• 申請號: 201210166453.2
• 申請日: 2012-05-25
• 公開（公告）號: CN102719407A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 崔尚金
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/23;A61P31/20;C12R1/93
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨

技術領域

本發明涉及一種豬細小病毒及其在制備豬細小病毒滅活疫苗中的應用，特別涉及一株自行分離得到的豬細小病毒BQ-C株以及由該病毒株制備得到的滅活疫苗。屬于生物疫苗領域。

背景技術

豬細小病毒(Porcine?parvovirus，PPV)是引起豬繁殖障礙的主要病原之一，PPV感染的主要是孕豬，特別是初產母豬在懷孕前容易受到感染，引起懷孕母豬流產、產死胎、胎兒木乃伊化等，而母體通常缺乏臨診癥狀；當然也會引起其他癥狀。自1966年Mayr和Mahnel發現和證實PPV存在及其致病性以來，國內外學者對其進行了廣泛深入的研究。近年來，PPV感染呈擴大上升趨勢，給全球養豬業造成了巨大的經濟損失。在我國，潘雪珠于1983年首次分離到了PPV。此后，在各地陸續分離到了數株PPV，目前，人們發現豬細小病毒經常與其他一些病毒，例如豬圓環病毒2型和豬繁殖與呼吸系統綜合征病毒等混合感染，導致斷奶仔豬多系統綜合征、皮炎、呼吸道綜合征等，給世界的養豬業造成很大的損失。雖然不同分離株均屬于同一血清型，但可以引起多種臨床癥狀，但都以造成繁殖障礙為主。目前，我國經產母豬及種公豬PPV陽性率高達80%以上。

本發明的發明人在2005年從黑龍江省某豬場分離到一株豬細小病毒，經實驗室鑒定為強毒株，馴化克隆后的毒株命名為PPV?BQ-C株。利用PPV?BQ-C株，開展了豬細小病毒病滅活疫苗的研制開發工作，篩選培育出免疫原性良好、效價穩定的豬細小病毒強毒BQ-C株，選擇了最適合該病毒增殖的ST細胞和符合制造疫苗的滅活劑、佐劑及其他條件。對制品的生產工藝、安全性、保護率、免疫程序、最小劑量、抗體持續期和保存期等都進行了試驗測定，并獲得了大量的試驗數據，證明本疫苗安全有效。在此基礎上，進行了中試生產，經抽樣檢驗，全部符合擬定的質量標準，并對中試產品進行了安全試驗和效力試驗，其結果也證實本疫苗能有效地預防由豬細小病毒引起的母豬繁殖障礙，在實驗室試驗、中間試制的基礎上，本發明研制出了豬細小病毒（BQ-C株）滅活疫苗，其結果也證實本疫苗能有效地預防由豬細小病毒引起的母豬繁殖障礙性，進一步驗證了本疫苗的各項質量標準。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種免疫原性良好、效價穩定的豬細小病毒株；

本發明的目的之二是提供所述的豬細小病毒株在制備疫苗中的應用；

本發明的目的之三是提供一種由所述的豬細小病毒株制備得到的疫苗；

本發明的目的之四是提供所述的疫苗在制備預防豬細小病藥物中應用。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術手段：

本發明的發明人在2005年從黑龍江省某豬場分離到一株豬細小病毒，經實驗室鑒定為強毒株，馴化后的毒株命名為PPV?BQ-C株。本發明的PPV?BQ-C株是從發生典型豬細小病毒感染的妊娠母豬所產弱仔中分離獲得的，因此與分離到的其它毒株相比在細胞上的增殖滴度高，對豬的免疫原性好。經豬睪丸傳代細胞系（ST）傳代后作為疫苗毒種，效檢用強毒為BQ-C株第7～10代。該毒株可以引起ST細胞90%以上感染。

本發明的一種豬細小病毒，為在ST細胞上傳代后的第7代病毒株，命名為豬細小病毒BQ-C株，分類命名為豬細小病毒，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址在北京市朝陽區北辰西路1號院中科院微生物研究所，其菌種保藏編號為：CGMCC?No.6091，保藏日期為2012年5月8日。

本發明還提供了所述的豬細小病毒在制備豬細小病毒滅活疫苗中的應用。

本發明的一種豬細小病毒滅活疫苗，其特征在于含有滅活后的本發明所述的豬細小病毒BQ-C株。

在本發明所述的豬細小病毒滅活疫苗中，優選的，所述的豬細小病毒BQ-C株采用以下方法進行滅活：0.3%的二乙烯亞胺（BEI）在32℃條件下滅活96小時后，加入0.02%硫代硫酸鈉終止滅活。

在本發明中，優選的，所述的豬細小病毒滅活疫苗是由15%（v/v）的法國賽比克公司的商品化MontanideTM?ISA15AVG佐劑和85%（v/v）的用二乙烯亞胺（BEI）滅活的豬細小病毒（BQ-C株）乳化后得到。