[發明專利]茶樹種性抗性與表現抗性生理鑒定方法

無效

• 申請號: 201210164428.0
• 申請日: 2012-05-24
• 公開（公告）號: CN102703573A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 王燁軍;徐奕鼎;黃建琴;張必樺;蘇有健;方吳云;夏先江;張永利
• 申請（專利權）人: 安徽省農業科學院茶葉研究所
• 主分類號: C12Q1/26
• 分類號: C12Q1/26;G01N21/31
• 代理公司: 安徽合肥華信知識產權代理有限公司 34112
• 代理人: 余成俊

技術領域

本發明屬于農學領域，具體涉及到一種茶樹種性抗性與表現抗性生理鑒定方法。

背景技術

超氧化物歧化酶（SOD酶）活性和膜脂過氧化產物丙二醛（MDA）含量通常被作為植物抗逆性的生理鑒定指標而在逆境生理研究中得到廣泛應用。SOD酶作為植物體內超氧自由基的清除劑，活性高低與膜穩定性呈正相關，反映的是茶樹抵御外界不利因素的能力；MDA植物在逆境條件下會發生膜脂過氧化作用，MDA是膜脂過氧化的最終產物之一，其含量變化常用來反映植物所受脅迫的傷害程度。茶樹在種植過程中，其抗性除了受種性抗性影響外，還受環境、氣候、生產管理水平等因素的制約，而表現出抗性差異。即同一品種在不同的環境、氣候、管理水平下其表現抗性有所不同。本方法以反映茶樹抗性能力的SOD酶和茶樹受脅迫程度的丙二醛為指標，從茶樹種性抗性和表現抗性兩個角度加以評價，所得結果與茶樹抗性田間呈現結果一致，能較準確地從生理角度對茶樹抗性進行評價。

目前，有關茶樹生理生化分析還沒有統一的取樣部位。羅軍武、唐和平、黃意歡等在研究茶樹不同抗寒性品種間保護酶類活性的差異時，選用的是成齡茶樹的成熟春葉(自上至下第二葉)；王玉、洪永聰、丁兆堂等在利用茶樹葉片解剖結構指數預測茶樹種質材料的抗寒性研究中采用的是枝條頂端以下第二張成熟葉片；而魏鵬在研究茶樹抗旱性部分生理生化指標時候采用的則是生長高度相近的新梢芽下第2葉和第3葉。本人通過對茶樹無性系后代間抗性生理因子的差異進行研究，結果表明：茶樹抗性生理指標在茶樹葉片中的分布以第3、第11位最為穩定，自第7位葉以后酶活性基本維持在一定水平，這表明茶樹無性系后代不但能繼承母本的形態特征，保持整齊化一的特點，在生理生化特性方面，本質上也具有一致性。然而茶樹是多年生作物，各種生理指標與外界環境因素及栽培條件和管理水平密切相關，修剪、采摘、病蟲害、光線、溫度等都會對茶樹生理生化因子造成一定的影響。此外，由于茶樹本身具有的品種差異性，因而取樣部位是否具有良好的代表性，在很大程度上決定了茶樹生理檢測的準確性。本方法采用未修剪、具有明顯葉位變化的茶樹枝條，自上而下采集木質化部位第一片、同一著生方向、無病蟲害且完整的葉片能較好代表茶樹的整體生理性狀。??

此外，在10℃～13℃休眠臨界狀態時，各品種茶樹SOD酶活性和MDA含量基本維持同一水平，而后隨溫度的下降，因其抗性大小而有所分化。因而，根據其生理指標的變化趨勢，可以對茶樹種性抗性和表現抗性作一鑒定。

發明內容

針對現有茶樹抗性生理鑒定的方法還不是很成熟的情況下，本發明提供了一種茶樹種性抗性與表現抗性生理鑒定方法，即以10℃～13℃茶樹臨界休眠狀態時，選取未修剪、具有明顯葉位變化的茶樹枝條，采集葉片，帶回實驗室后，進行種性抗性指標（SOD酶）和表現抗性指標（MDA）基礎值檢測；而后當氣溫降至0℃以下時，按上述方法對茶樹種性抗性和表現抗性指標重新測定后，依指標變化趨勢對茶樹抗性進行評價。

本發明通過以下技術方案得以實現：

茶樹種性抗性與表現抗性生理鑒定方法，包括選穗、葉片采集、洗凈、擦干、打孔取樣、研磨、離心、抗性指標檢測和抗性評價步驟；具體是在10℃～13℃茶樹休眠臨界狀態時，選取未修剪的枝條，采集葉片，進行種性抗性指標SOD酶和表現抗性指標MDA基礎值的檢測；而后當氣溫降至0℃以下時，按上述方法對茶樹種性抗性指標SOD酶和表現抗性指標MDA重新測定后，依指標數值的變化趨勢對茶樹抗性進行評價。

茶樹種性抗性與表現抗性生理鑒定方法，所述的選穗、葉片采集為在10℃～13℃茶樹休眠臨界狀態時，選取未修剪的茶樹枝條，自上而下采集木質化部位第一片葉，裝入塑料袋內封口，貯于底部置有冰塊的保溫箱內，帶回實驗室備用。

茶樹種性抗性與表現抗性生理鑒定方法，所述的打孔取樣、研磨、離心為選取的葉片用蒸餾水沖洗兩次，并用潔凈濾紙吸干，用打孔器，避開葉片主脈打取Φ=0.5cm圓形葉片作為SOD酶、丙二醛測試材料；按SOD酶和丙二醛檢測方法分別稱取0.5g和0.2g，分別添加2ml緩沖液和少許石英砂及適量不溶性吡咯烷酮，所述的SOD酶為0.1mol/l預冷的pH7.8磷酸緩沖液，丙二醛為10%三氯乙酸，冰浴中迅速研磨成漿，SOD酶檢測用3ml?0.1mol/l的磷酸緩沖液，丙二醛檢測用10%三氯乙酸8ml分次沖洗研缽，轉入10ml離心管中，在4℃條件下以4500r/min離心10min，上清液在相同條件下二次離心后分別用于SOD酶、MDA檢測。