[發明專利]一種魚粉中肌胃糜爛素的檢測方法

有效

• 申請號: 201210163066.3
• 申請日: 2012-05-24
• 公開（公告）號: CN102692384A
• 公開（公告）日: 2012-09-26
• 發明（設計）人: 陶志華;張宏梅;韓雅莉;譚竹鈞
• 申請（專利權）人: 廣東工業大學
• 主分類號: G01N21/25
• 分類號: G01N21/25;G01N1/34
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

技術領域

本發明涉及生物領域，具體涉及一種魚粉中肌胃糜爛素的檢測方法。

背景技術

肌胃糜爛素是魚粉在直火加熱制作過程中,可能是由于組胺或者是組氨酸與賴氨酸在高溫下的反應產物。配合魚粉飼料中的肌胃糜爛素是導致雞、鴨、魚等養殖動物發生肌胃糜爛、食欲不振、產卵率下降、吐黑、死亡等現象的主要原因，而且肌胃糜爛素造成雞鴨等動物發病率和死亡率均偏高。肌胃糜爛素引起小雞發病現象在國內也有相應報道，2000年4月，寧波市某雞場喂食了含有肌胃糜爛素的魚粉配合飼料，引起小雞大量死亡的現象。2005年,有兩個中型肉雞養殖場同時爆發肉雞肌胃糜爛病癥。2008年-2009年期間，在遼寧，山東，河南，江蘇，安徽等地的雞養殖場，給小雞喂食魚粉配合飼料后，小雞發生嚴重的肌胃層糜爛、吐黑等雞病理現象。雖然經治療未造成小雞大量死亡，但是治療使用的藥劑會給食用此類禽肉的人們帶來健康的隱患。所以開發肌胃糜爛素的檢測技術是當務之急。

作為監測魚粉肌胃糜爛素的方法也相繼被開發。日本東京大學教授伊藤教授開發了肌胃糜爛素的OPA誘導后的熒光檢測技術,此方法需要復雜的誘導化的前處理過程,而且需要三步色譜純化過程。Hsu利用免疫化學方法檢測肌胃糜爛素,?但是需要特殊的抗體。Marcla開發了放射標記的放射性標記的免疫測定法,但是這些方法都需要特殊的抗體，抗體制作起來比較困難,而且標記實驗過程需要特殊的設施來進行實驗操作。Manosalva開發了應用單克隆抗體ELISA檢測魚粉中的肌胃糜爛素的方法,但是這方法也需要特殊抗體。

到目前為止,國內外沒發現有魚粉中肌胃糜爛素的簡易檢測方法的相關報道。本發明涉及的魚粉中的肌胃糜爛素的方法,是通過濾紙電泳層析方法,能有效的達到肌胃糜爛素與干擾物的分離,并能通過待測樣品與標準樣品面積比進行定量分析,檢測濃度最低限值達到10ppm。?

發明內容

本發明的目的是提供一種魚粉加工中產生的有害物質肌胃糜爛素的檢測方法。

本發明另一目的提供魚粉中肌胃糜爛素的提取方法。

本發明的目的是這樣實現的：

本發明提供的一種魚粉中肌胃糜爛素的檢測方法，具有以下步驟：

1）在魚粉中加入5倍重量的0.1mol/L?HCl，混合攪拌10分鐘；

2）通過離心分離，得到含有肌胃糜爛素的上清液;

3）將上清液點到濾紙上,?通過電氣泳動裝置分離肌胃糜爛素及其它干擾物；

4)?干燥后,分離后的肌胃糜爛素通過A發色液和B發色液雙重發色噴霧，通過發色后所測樣品與標準樣品的比值對肌胃糜爛素定性定量分析；所述A發色液是20mM二甲基對苯二胺和200mM亞硝酸鈉混合溶液，其體積比是1:1，所述B發色液是10wt%無水碳酸鈉溶解到5wt%乙醇溶液的混合溶液。

上述步驟2）中經過12000rpm的離心機離心分離10～15分鐘。

上述步驟3）中在濾紙同時上樣7個樣品。

上述步驟3）中電氣泳動裝置的電壓為800V，工作時間為15分鐘。

上述步驟3）中干擾物是組胺、組氨酸、2-甲基-咪唑、4-甲基-咪唑。

上述步驟4）中干燥是在恒溫干燥箱100℃干燥5分鐘。

上述步驟4）中發色后通過所測樣品的面積與標準樣品的面積比進行定量分析。

本發明的有益效果：

本發明通過電氣泳動在10-15分鐘達到肌胃糜爛素與干擾物的分離，并在30分鐘內同時測定7個樣品，而且不需要預處理，并且檢量限值能達到10ppm，簡單迅速的測定技術能應用在魚粉加工廠，飼料加工廠，雞鴨養殖場等。本方法能從魚粉中的組胺,組氨酸等干擾物中有效快速分離肌胃糜爛素,并且通過待測樣品與標準樣品面積比進行定量分析。

附圖說明

圖1是肌胃糜爛素的分離示意圖。

具體實施方式

實施例1：魚粉的制備

材料：沙丁魚（產地：日本）

魚粉的制備：

1、沙丁魚粉碎后放置在25℃24h,然后121℃蒸煮15分鐘，130℃干燥3h，粉碎。

2、肌胃糜爛素的提取

稱取200mg魚粉，加入5倍量0.1mol/L?HCl，混合攪拌10分鐘。

?3、離心分離

在12000rpm離心10min，取上清液。

?4、電泳

每一樣品取5μ1,吸到濾紙片,設定在電泳用濾紙上,然后在800V電壓電泳15分鐘。

5、干燥

在100℃恒溫干燥箱干燥5min。

6、發色