[發(fā)明專利]一種細(xì)腳擬青霉的液體栽培方法無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201210162110.9 | 申請(qǐng)日： | 2012-05-24 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN102657030A | 公開(kāi)（公告）日： | 2012-09-12 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 黃建忠;鄭永標(biāo) | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 福建師范大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | A01G1/04 | 分類號(hào)： | A01G1/04 |
| 代理公司： | 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡學(xué)俊 |
| 地址： | 350108 福建省*** | 國(guó)省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 細(xì)腳擬 青霉 液體 栽培 方法 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
????本發(fā)明涉及一種細(xì)腳擬青霉的栽培方法，更具體涉及一種細(xì)腳擬青霉的液體栽培方法。
背景技術(shù)
細(xì)腳擬青霉（Paecilomyces?tenuipes?(Peck)?Samson）是高雄山蟲草（Cordyceps?takaomontana?Yakushijiet?Kumazaw）的無(wú)性型，以天然冬蟲夏草作對(duì)照分析表明，細(xì)腳擬青霉的主要化學(xué)組分如甾醇類、糖醇類、生物堿、有機(jī)酸類和微量元素與前者十分相似，所含氨基酸種類亦相同,但多種氨基酸含量卻高于冬蟲夏草。在日本和韓國(guó)該菌已被成功作為冬蟲夏草替代品進(jìn)行了開(kāi)發(fā)利用。藥理作用方面的研究表明細(xì)腳擬青霉具有抗腫瘤、抗菌、抗氧化和免疫調(diào)節(jié)功能。據(jù)已報(bào)道的相關(guān)文獻(xiàn)，細(xì)腳擬青霉一般采用固體栽培的方式進(jìn)行，液體栽培的方式還未報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種細(xì)腳擬青霉的液體栽培方法，該方法相較于固體栽培，具有操作簡(jiǎn)單，菌種的流動(dòng)性好，接種后容易分散等優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：
將斜面菌種活化后，取菌塊接種到馬鈴薯葡萄糖蛋白胨液體培養(yǎng)基中，于25-28?℃搖瓶培養(yǎng)7-10d，制備液體菌種；取液體菌種，以5－20%的接種量，接種到馬鈴薯葡萄糖蛋白胨液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為：20-25?℃，培養(yǎng)30-40?d；所述馬鈴薯葡萄糖蛋白胨液體培養(yǎng)基的組成為：馬鈴薯5－30%，葡萄糖0.5－5%，蛋白胨0.1－2%，余量為水。
本發(fā)明采用液體栽培，相較于固體栽培，其操作簡(jiǎn)單，菌種的流動(dòng)性好，接種后容易分散，不易污染及生長(zhǎng)速度快等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
細(xì)腳擬青霉的液體栽培步驟如下：
1）配制液體培養(yǎng)基。所述的液體培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖蛋白胨液體培養(yǎng)基（200?g馬鈴薯去皮，切成小塊，加水煮沸20?min，八層紗布過(guò)濾，收集馬鈴薯濾液，加入葡萄糖20?g，蛋白胨10?g，用水定容至1?L），121℃，高壓蒸汽滅菌30?min。
2）液體菌種制備。將細(xì)腳擬青霉斜面菌種活化，將活化的斜面菌種挑出按0.5～1.0cm2菌塊接種到裝有150?ml的所述液體培養(yǎng)基的三角瓶中，于28?℃，230?rmp/min的搖床中培養(yǎng)7d，制備液體菌種。
3）細(xì)腳擬青霉的液體靜置栽培。將液體菌種以10%接種量，接種到裝有4?L馬鈴薯葡萄糖蛋白胨液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，于25℃培養(yǎng)35d。
4）采收。經(jīng)過(guò)35天培養(yǎng)，細(xì)腳擬青霉子實(shí)體可以采收，子實(shí)體干重的收率為2.50 g/，子實(shí)體的長(zhǎng)度可達(dá)到52mm左右（圖1）。
待細(xì)腳擬青霉生長(zhǎng)成熟后，不僅可采收子實(shí)體，而且其發(fā)酵液中含有大量具有生理活性的物質(zhì)，如含有具有降膽固醇作用的葵內(nèi)酯結(jié)構(gòu)類似物等活性化合物。發(fā)酵液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀真空濃縮，而后用乙酸乙酯萃取，真空濃縮成膏狀，再應(yīng)用反相硅膠、凝膠和正相硅膠等層析技術(shù)可分離提取葵內(nèi)酯等各類活性化合物。因此采用液體栽培細(xì)腳擬青霉具有良好的經(jīng)濟(jì)效益。
實(shí)施例2
細(xì)腳擬青霉的液體栽培步驟如下：
將斜面菌種活化后，取菌塊接種到馬鈴薯葡萄糖蛋白胨液體培養(yǎng)基中，于25℃搖瓶培養(yǎng)10d，制備液體菌種；取液體菌種，以5%的接種量，接種到馬鈴薯葡萄糖蛋白胨液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為：23?℃，培養(yǎng)30d；所述馬鈴薯葡萄糖蛋白胨液體培養(yǎng)基的組成為：馬鈴薯5%，葡萄糖5%，蛋白胨2%，余量為水。
實(shí)施例3
細(xì)腳擬青霉的液體栽培步驟如下：
將斜面菌種活化后，取菌塊接種到馬鈴薯葡萄糖蛋白胨液體培養(yǎng)基中，于22℃搖瓶培養(yǎng)8d，制備液體菌種；取液體菌種，以20%的接種量，接種到馬鈴薯葡萄糖蛋白胨液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為：20℃，培養(yǎng)40d；所述馬鈴薯葡萄糖蛋白胨液體培養(yǎng)基的組成為：馬鈴薯30%，葡萄糖0.5%，蛋白胨0.1%，余量為水。
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