[發明專利]一種修飾胞苷素的制備方法

在審

• 申請號: 201210161906.2
• 申請日: 2012-05-23
• 公開（公告）號: CN103421865A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 王玉成;高玉忠;王理想;王友志;楊凱;曹再林;張春來;靳長娟
• 申請（專利權）人: 徐州諾特化工有限公司
• 主分類號: C12P19/38
• 分類號: C12P19/38;C07H19/06;C07H1/00;C12R1/55
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技術領域：本發明屬于微生物農藥技術領域，涉及一種修飾胞苷素的制備方法。

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背景技術：

農用抗生素（agricultural?antibiotics），簡稱農抗，是指由微生物發酵產生、具有農藥功能、用于農業上防治病蟲草鼠等有害生物的次生代謝產物。與一般化學合成農藥相比，農用抗生素具有以下特點：①結構復雜；②活性高、用量小、選擇性好；③易被生物或自然因素所分解，不在環境中積累或殘留；④生產原料為淀粉、糖類等農產品，屬于再生性能源；⑤采用發酵工程生產，同一套設備只要改變菌種即可生產不同的抗生素，生產菌大多是土壤中的放線菌，也有真菌和細菌。

核苷類抗生素為一類重要的抗生素，它們是一大類對核苷和核苷酸結構修飾的化合物，以核苷為其共同的母核，有抗細菌、抗真菌、抗錐蟲、抗腫瘤、鋤草、殺蟲、增強免疫力等較廣范圍的生物活性。不同的核苷類抗生素的差異在于母核以外的側鏈基團。農業上應用的核苷類抗生素主要有殺稻瘟菌素S（Blasticidin?S）和多氧霉素（Polyoxins）。修飾胞苷素為側鏈為-C₄H₈ClO₉的氮取代胞苷素。

迄今為止，已經從各種生物（包括細菌、真菌、各類植物）中分離出3800多種鹵化物，約95%的鹵化物為氯化和溴化物，氟化和碘化物很少，少數化合物既含氯也含碘。許多鹵化物，如氯霉素（chloramphenicol）、7-氯四環素（7-chlotetracycline）、萬古霉素（vancomycin）等都是重要的抗生素。雖然鹵素原子的類型、數量以及位置對化合物生物活性的影響沒有特定的規律，但是某些鹵化物與相應的非鹵化物相比，鹵化可以增強其生物活性。如，2-氯硝吡咯菌素的抗真菌活性只有硝吡咯菌素（含有兩個氯原子）的10%；與其含氯衍生物相比，不含氯的蝴蝶霉素沒有抗菌活性。

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發明內容：

本發明的目的是提供一種修飾胞苷素的制備方法。

本發明通過下述方法實現的：

菌株：以吸水鏈霉菌海南變種S101菌株經自然分離后獲得的S510菌株為出發菌株。

培養基：玉米粉15～25g、豆餅粉20～35g、葡萄糖15～25g、淀粉8～12g、氯化銨1～5g、碳酸鈣1～5g，硫酸鎂0.1～0.5，硫酸亞鐵0.1～0.5，氯化鈉0.1～0.5g，磷酸氫二鈉0.1～0.5g，加自來水至1000mL。經121℃高壓濕熱滅菌20min。

發酵培養：搖床震蕩培養，轉速為150～250轉/分鐘，發酵溫度：25～35℃，罐壓0.01～0.15MPa，通氣量1:0.5～1，發酵時間50～100h。

發酵產物分離和純化：發酵液萃取，用Sephadex?G-25柱層析，水洗脫，洗脫液經HPLC檢測后（COSMOSIL?C18?Econopak柱，流動相0.03%三氟醋酸水溶液，流速0.4mL/min，紫外檢測波長220nm），將其中保留時間約為5.5min的主要組分含量在75～85%和60～75%的部分分別合并，再經真空冷凍干燥后即可得到初次分離物。含量在60～75%的初提物再經一次常壓柱層析，即可將純度提高到80～85%，合并兩次所得的含量在75%以上的樣品，用HPLC半制備柱進行制備，最后可得到純度為90.12%的精品。將精品溶液冷干后，所得微黃色粉末即為側鏈-C₄H₉O₉的氮取代胞苷素。效價測定：管碟法。

????化學修飾：發酵產物分離純化后和KCl反應，以正丁醇為溶劑，FeCl₃為催化劑，通過配位催化鹵代反應來制備帶側鏈-C₄H₈ClO₉的氮取代胞苷素。效價測定：管碟法。

本發明的修飾胞苷素具有更高的生物抗性和結構穩定性，該制備工藝化學選擇性好，工藝條件溫和，生產過程環境友好。所得側鏈-C₄H₉O₉的氮取代胞苷素效價為2800μg/L，側鏈-C₄H₈ClO₉的氮取代胞苷素效價為6418μg/L。基于上述優點，本發明的帶側鏈-C₄H₈ClO₉的氮取代胞苷素將在生物農藥領域中發揮重要的作用，應用前景廣闊。

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具體實施方式