[發明專利]利用固定化酶從花生餅粕中生產活性肽的方法

有效

• 申請號: 201210161902.4
• 申請日: 2012-05-23
• 公開（公告）號: CN102676624A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 蘆鑫;黃紀念;孫強;侯傳偉;宋國輝;張麗霞
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C12N11/14;C12N11/10
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104
• 代理人: 劉建芳;楊海霞

1.一種利用固定化酶從花生餅粕中生產活性肽的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）制備化學改性的磁性殼聚糖微粒：

在堿性條件下，將殼聚糖粉末與環氧氯丙烷混合后于50－100℃攪拌反應1-2?h，然后加入二胺化合物繼續反應1.5-2.5?h，反應結束后固液分離，取固體備用，投料比按照每1g殼聚糖粉末添加3-5ml環氧氯丙烷和1-5ml二胺化合物計；

將固體用稀酸溶解后，加入三聚磷酸鈉和粒徑≤100nm、純度不小于95%的四氧化三鐵超聲波攪拌處理，三聚磷酸鈉的加入量為固體重量的0.05-0.1倍，四氧化三鐵的加入量為固體重量的0.25-0.75倍，反應完畢后用磁鐵吸附體系中的固體顆粒，即為改性后的磁性殼聚糖微粒，記為固體顆粒a；

2）磁性殼聚糖固定復合蛋白酶：將上述改性后的磁性殼聚糖微粒加入到含2-5V%戊二醛的磷酸緩沖液中室溫下攪拌1-3?h，然后加入含復合蛋白酶的磷酸緩沖液繼續攪拌3-6?h，結束后用磁鐵將體系中的固體顆粒吸附出，記為固體顆粒b，備用；其中，所述磷酸緩沖液濃度為0.05－0.2?mol/L，pH?6.8-8.0；投料比按照每1g改性后的磁性殼聚糖微粒添加10-30mL含戊二醛的磷酸緩沖液和2-6?mL含復合蛋白酶的磷酸緩沖液計，復合蛋白酶在體系中的質量終濃度為0.1-2.5%；

3）制備花生蛋白：將花生餅粕粉碎、脫油后，采用堿提酸沉提取花生蛋白；

4）制備花生活性肽：將花生蛋白用蒸餾水溶解并調至pH為?8.0－10.5，然后加入固體顆粒b于35－50?℃酶解2－4h，酶用量為3000－4000?u/g蛋白，反應結束后調至酶解反應體系pH為7.0；

5）肽液純化處理：取步驟4）所得酶解反應體系，將除去固體顆粒后的剩余溶液離心，取上清液用活性炭吸附脫色、納濾膜脫鹽、超濾膜分離得花生活性肽精制液，花生肽精制液再經濃縮、噴霧干燥制得花生活性肽干粉。

2.如權利要求1所述利用固定化酶從花生餅粕中生產活性肽的方法，其特征在于，步驟1）中，將殼聚糖用堿液浸泡6－9?h后加入環氧氯丙烷；所述的二胺化合物為乙二胺、1，4-丁二胺、1，6-已二胺、1，8-辛二胺或1，12-二氨基十二烷。

3.如權利要求1所述利用固定化酶從花生餅粕中生產活性肽的方法，其特征在于，步驟1）中，超聲波攪拌處理條件為：20?kHZ，500－800?W，30－60?min，150－250?rpm。

4.如權利要求1所述利用固定化酶從花生餅粕中生產活性肽的方法，其特征在于，步驟2）中，復合蛋白酶由堿性蛋白酶和中性蛋白酶按酶活比2:1混合而成，所述堿性蛋白酶為蛋白酶2709或蛋白酶Alcalase，所述中性蛋白酶為胰蛋白酶、蛋白酶Neutrase或蛋白酶AS1.398。

5.如權利要求1所述利用固定化酶從花生餅粕中生產活性肽的方法，其特征在于，步驟3）具體為：將花生餅粕粉碎后過60－80目，與正己烷混合回流2－4?h進行脫油，脫油后的花生餅粕粉與水按質量比1:6－12混合，用堿試劑調至pH值為8－12，攪拌1－2h，4000－4500?rpm離心10－20?min，取沉淀重復堿提過程，合并兩次上清液，用80－100目濾網過濾，濾液加酸調至pH?為4.10－4.60，靜置10－20?min，4000－4500?rpm轉速下離心10－20?min，收集沉淀，即為花生蛋白。