[發明專利]一種線粒體呼吸鏈復合物I酶活性檢測方法和試劑

無效

• 申請號: 201210161881.6
• 申請日: 2012-05-23
• 公開（公告）號: CN103424384A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 安祺;孫宏博
• 申請（專利權）人: 北京和信非凡生物技術有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種線粒體呼吸鏈復合物I（NADH-Q還原酶）活性測定方法，其特征在于它的原理如下：

NADH-Q還原酶在特定條件下能夠將NADH中的電子轉移給氧化型電子受體R生成還原型的R；還原型的R在特定的激發波長下可以發射出特異波長的熒光，因此在特定的條件下可檢測到還原型R的熒光值，由于NADH-Q還原酶催化底物反應的速率與還原型R的生產量成正比，因此檢測還原型R的熒光值的變化，就可以計算出NADH-Q還原酶的酶活力。

2.?如權利要求書1所述的電子受體R，其特征在于：它是一種在物理和化學領域普遍被接受的任何能在氧化還原反應中被還原的分子或試劑，氧化型R被NADH-Q還原酶還原后產生還原型R，還原型R可以在特定激發光條件下發射出特異的熒光。

3.?如權利要求書1所述的電子受體R，其特征在于，它是刃天青（Resazurin），它的結構式為：

刃天青被還原后的產物是試鹵靈（Resorufin），試鹵靈在530-580nm激發波長下，可以發射波長為560-620nm的熒光。

4.?一種NADH-Q還原酶活性檢測試劑，其特征在于：它是根據權利要求書1所述的原理和方法來開發配制的，它主要用于NADH-Q還原酶的酶活性的分析和檢測。

5.?如權利要求書4所述的NADH-Q還原酶活性檢測試劑，其特征在于：其主要成分包括如權利要求書2或3所述的電子受體R，這種檢測試劑主要用于NADH-Q還原酶的酶活性的分析和檢測。

6.?如權利要求書4-5所述的NADH-Q還原酶活性檢測試劑，其特征在于：其主要成分還可以包括電子供體NADH，這種檢測試劑主要用于NADH-Q還原酶的酶活性的分析和檢測。

7.?如權利要求書4-6所述的NADH-Q還原酶活性檢測試劑，其特征在于：其成分中還可以包括抑制劑，這種抑制劑是在酶學上普遍被接受的各種能夠抑制NADH-Q還原酶酶活力的試劑或分子。

8.?如權利要求書4-6所述的NADH-Q還原酶活性檢測試劑，其特征在于其成分還可以包括緩沖液和穩定劑，所述的穩定劑是被物理、化學和酶學上普遍接受和使用的各種表面活性劑；所述的緩沖液中的緩沖試劑是被物理、化學和酶學上普遍接受的能將體系的pH值緩沖或穩定5.0—9.0的范圍中的試劑。

9.?一種NADH-Q還原酶活性檢測試劑，其特征在于：它是基于權利要求書1-8所述的原理、方法和試劑的基礎上開發配制的，其主要成分包括：

???如權利要求書8所述的緩沖液???????????????????10—1000mmol/L

???pH范圍?????????????????????????????????????????????5.0—9.0

???如權利要求書8所述的穩定劑??????????????????????0.01%—10%

???NADH????????????????????????????????????????0.01—10mmol/L

???如權利要求書7所述的抑制劑??????????????????????0—20mmol/L

???如權利要求書1-3所述的電子受體R??????????????0.002—10mmol/L

這種檢測試劑主要用于NADH-Q還原酶的酶活性分析和檢測。

10.?根據權利要求9所述NADH-Q還原酶活性檢測試劑，其特征在于：由緩沖液、穩定劑、NADH、抑制劑、R組成雙劑試劑；試劑1，由緩沖液、穩定劑、NADH、R組成；試劑2，由抑制劑組成。

11.?根據權利要求9所述NADH-Q還原酶活性檢測試劑，其特征在于：由緩沖液、穩定劑、NADH、抑制劑、R組成組成三劑試劑；試劑1，由緩沖液、穩定劑、NADH組成；試劑2，由緩沖液、穩定劑、R組成；試劑3，由抑制劑組成。

12.?如權利要求書1-11所述的NADH-Q還原酶活性測定的方法和酶活性檢測的試劑，其特征在于，這種檢測方法和試劑可以用于分析和檢測各種待測樣本中的NADH-Q還原酶的酶活力。

13.?如權利要求書1-11所述的NADH-Q還原酶活性測定的方法和酶活性檢測的試劑，其特征在于，這種檢測方法和試劑可以用于分析和檢測人體的各種體液、組織和細胞樣本中的NADH-Q還原酶的酶活力。

14.?如權利要求書1-11所述的NADH-Q還原酶活性測定的方法和酶活性檢測的試劑，其特征在于，這種檢測方法和試劑可以用于分析和檢測完整細胞、已破碎細胞、完整線粒體和已破碎線粒體中的NADH-Q還原酶的酶活力。

15.?如權利要求書1-11所述的NADH-Q還原酶活性測定的方法和酶活性檢測的試劑，其特征在于，這種檢測方法和試劑可以用于分析、檢測和診斷與NADH-Q還原酶的酶活力異常導致的各種疾病，特別是由NADH-Q還原酶的酶活力異常導致的各種遺傳和代謝疾病。