[發(fā)明專利]一粒小麥成熟胚的組織培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210161576.7
• 申請(qǐng)日: 2012-05-23
• 公開（公告）號(hào): CN102668982A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭有良;江千濤;魏育明;馬建;劉亞西;王際睿
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;王加嶺

1.一粒小麥成熟胚的組織培養(yǎng)方法，包括種子消毒、剝離種胚、愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)、分化培養(yǎng)及生根培養(yǎng)的步驟，其特征在于，

所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟中使用的培養(yǎng)基I為：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)和/或6-糖氨基嘌呤(KT)后制成的pH值為5.8-6.0的培養(yǎng)基；所述分化培養(yǎng)步驟中使用的培養(yǎng)基II為：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加α-萘乙酸(NAA)、6-(4羥基-3-甲基-2-反丁烯基)氨基嘌呤(ZT)、6-芐氨基嘌呤(6-BA)、6-糖氨基嘌呤(KT)或2-羥乙基-三甲基氫氧化膽堿(CC)中的一種或多種后制成的pH值為5.8-6.0的培養(yǎng)基。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配方為：

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟中使用的培養(yǎng)基I中2，4-D與KT的添加比例為：2，4-D0.5-1mg/L+KT?0-0.05mg/L、2，4-D?1-2mg/L+KT?0-0.05mg/L、2，4-D3-4mg/L+KT?0-0.05mg/L、2，4-D?5-6mg/L+KT?0-0.05mg/L、2，4-D0.5-1mg/L+KT?0.1-0.15mg/L、2，4-D?1-2mg/L+KT?0.1-0.15mg/L、2，4-D?3-4mg/L+KT?0.1-0.15mg/L、2，4-D?5-6mg/L+KT?0.1-0.15mg/L、2，4-D?0.5-1mg/L+KT?0.5-0.6mg/L、2，4-D?1-2mg/L+KT?0.5-0.6mg/L、2，4-D?3-4mg/L+KT?0.5-0.6mg/L或2，4-D?5-6mg/L+KT?0.5-0.6mg/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述分化培養(yǎng)步驟中使用的培養(yǎng)基II中NAA、ZT、6-BA、KT與CC的添加比例為：KT?0.5-1.0mg/L、KT?1.0-2.0mg/L、KT?2.0-3.0mg/L、NAA0.5-1.0mg/L+KT?1.0-2.0mg/L、NAA?0.5-1.0mg/L+ZT?1.0-2.0mg/L、NAA0.5-1.0mg/L+6-BA?1.0-2.0mg/L、NAA?0.5-1.0mg/L+6-BA1.0-2.0mg/L+KT?1.0-2.0mg/L、NAA?0.5-1.0mg/L+6-BA1.0-2.0mg/L+KT?1.0-2.0mg/L+ZT?1.0-2.0mg/L或NAA0.5-1.0mg/L+6-BA?1.0-2.0mg/L+KT?1.0-2.0mg/L+ZT?1.0-2.0mg/L+CC1.0-2.0mg/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟中使用的培養(yǎng)基I為基礎(chǔ)培養(yǎng)基+2，4-D?1-2mg/L+KT0-0.05mg/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述分化培養(yǎng)步驟中使用的培養(yǎng)基II為基礎(chǔ)培養(yǎng)液+NAA?0.5-1.0mg/L+ZT?1.0-2.0mg/L。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，種子消毒的方法為：將一粒小麥成熟種子于水中浸泡16-18小時(shí)后，置于75-80%的酒精中處理0.5-1.5分鐘，然后浸泡于0.1-0.15%的升汞中13-15分鐘，最后用無菌水沖洗3-5次。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)的方法為：將剝離得到的成熟胚，盾片朝上接種于培養(yǎng)基I上，置于24-25°C暗培養(yǎng)，得到成熟胚愈傷組織。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，分化培養(yǎng)的方法為：將成熟胚愈傷組織轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基II中，置于25°C，光照16小時(shí)/天，光照強(qiáng)度為2000-3000lux，培養(yǎng)至出苗。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，生根培養(yǎng)的方法為：將經(jīng)過分化培養(yǎng)后長(zhǎng)出的苗轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，待長(zhǎng)至苗高達(dá)6-9cm時(shí)，煉苗3-5天，最后將植株移入大田中或進(jìn)行溫室培養(yǎng)；其中，所述生根培養(yǎng)基的配方為：