[發明專利]一種抑制結核分枝桿菌的化合物、其篩選方法和用途

無效

• 申請號: 201210161145.0
• 申請日: 2012-05-21
• 公開（公告）號: CN102732474A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 陸勇軍;佘志剛;牛長紅;陳洪
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12Q1/42;C12Q1/02;C07C50/34;A61K31/122;A61P31/06;A61P3/10;A61P3/06;A61P3/04;A61P9/10;A61P1/00;A61P1/18;A61P37/00
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫

1.一種抑制結核分枝桿菌化合物的篩選方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）建立以酪氨酸磷酸酶為靶點的篩選模型：以結核菌H37Rv株基因組DNA為模板，PCR克隆酪氨酸磷酸酶基因，轉化寄主細胞，培養轉化體，從培養物中獲得重組酪氨酸磷酸酶，進行酶活分析，建立以酪氨酸磷酸酶為靶點的篩選模型；

（2）利用步驟（1）所建立的篩選模型篩選對酪氨酸磷酸酶具有抑制活性的化合物。

2.如權利要求1所述的抑制結核分枝桿菌化合物的篩選方法，其特征在于，所述步驟（1）中采用的宿主細胞為大腸桿菌，用表達載體的目的片段經雙酶切，與pET-28a(+)載體連接，轉化至大腸桿菌BL21，經IPTG誘導，得到高效可溶性表達，獲得重組酪氨酸磷酸酶。

3.如權利要求1所述的抑制結核分枝桿菌化合物的篩選方法，其特征在于，所述步驟（1）中采用酪氨酸磷酸酶試劑盒對重組酪氨酸磷酸酶進行酶活分析。

4.一種抑制結核分枝桿菌的化合物，其特征在于，所述化合物采用權利要求1中的方法篩選得到。

5.如權利要求3所述的抑制結核分枝桿菌的化合物，其特征在于，所述化合物命名為Bostrycin，所述化合物的分子結構式為：

6.如權利要求4或5所述的抑制結核分枝桿菌的化合物，其特征在于，所述化合物是海洋微生物天然代謝活性產物。

7.如權利要求4或5所述的抑制結核分枝桿菌的化合物，其特征在于，所述化合物抑制結核分枝桿菌的最低濃度為7.5μg/mL。

8.一種如權利要求4或5所述的化合物，其特征在于，所述化合物的作用靶點為酪氨酸磷酸酶。

9.一種如權利要求8所述的化合物，其特征在于，所述化合物的作用靶點的驗證方法包括以下步驟：

（1）利用權利要求1中步驟（1）所建立的模型驗證化合物對酪氨酸磷酸酶的酶活抑制活性；

（2）利用Docking軟件進行生物信息學預測，化合物與酪氨酸磷酸酶相互作用；

（3）利用熒光光譜驗證，化合物與酪氨酸磷酸酶相互作用；

（4）利用圓二色譜驗證，化合物與酪氨酸磷酸酶相互作用。

10.一種如權利要求4或5所述化合物在制備用于治療誘因或誘因之一是酪氨酸磷酸酶的疾病的藥物中的用途。