[發明專利]一種高速逆流色譜法從黨參中分離黨參生物堿單體的方法

有效

• 申請號: 201210160726.2
• 申請日: 2012-05-22
• 公開（公告）號: CN102659656A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發明（設計）人: 祝晨蔯;林朝展
• 申請（專利權）人: 廣州中醫藥大學
• 主分類號: C07D207/12
• 分類號: C07D207/12
• 代理公司: 廣州市天河廬陽專利事務所 44244
• 代理人: 胡濟元

技術領域

本發明涉及雜環化合物，具體涉及從中藥材黨參中分離黨參生物堿單體的方法。

背景技術

黨參為桔梗科（Companulaceae）植物黨參植物Codonopsis?pilosula(Franch)Nannf.、素花黨參Codonopsis?pilosula?Nannf.?Var.modesta(Nannf.)L.T.Shen或川黨參Codonopsis?tangshen?Oliv.的干燥根。黨參是一味傳統補氣中藥，味甘，性平，具有健脾補肺，益氣生津之功效，主治脾胃虛弱，食少便溏，四肢乏力，肺虛咳喘，氣短自汗，氣血兩虧諸證。在我國盛產于甘肅、山西、陜西、四川、貴州、云南等地。近年來，文獻報道黨參中吡咯烷類生物堿具有改善心肌缺血、同時增強PGI₂合成和抑制血小板活性的功能，臨床上治療冠心病心絞痛具有較好療效。

目前文獻報道的，用于從黨參中分離黨參生物堿單體的方法為柱層析法，如大孔樹脂柱層析法、硅膠柱層析法、氧化鋁柱層析法和硅烷鍵合硅膠反相材料柱層析法。柱層析法的不足之處是：分離周期長，回收率低，分離效果很不理想。

關于黨參生物堿單體的提取方法也有文獻報道,如蔡東胡等發表的“黨參的酚苷和吡咯烷生物堿”（Tung-Hu?Tsai,Lie-Chwen?Lin,Chem.Pharm.Bull.,56：492-496(2008)），公開號為CN1789244A的專利申請。但是，上述文獻所公開分離方法均為柱層析法，其步驟冗長、繁瑣，耗時長、純度與得率均較本發明制得的低。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種高速逆流色譜法從黨參中分離黨參生物堿單體的方法，該方法不僅效率高，而且所得到的黨參生物堿單體的純度高。

本發明解決上述問題的技術方案如下：

一種高速逆流色譜法從黨參中分離黨參生物堿單體的方法，該方法包括以下步驟：

1）取黨參藥材，切片，用乙醇溶液溫浸提取，過濾，回收溶劑后減壓濃縮得到浸膏，然后將所得浸膏用質量百分濃度1-5%的酸水溶液溶解，調節pH值至9-11后用有機溶劑連續萃取3~6次，合并萃取液，蒸干，得到黨參總生物堿；

2）將高速逆流色譜兩相溶劑體系置于分液漏斗中，搖勻、靜置分層，平衡后，將上、下相分離；其中所述的高速逆流色譜兩相溶劑體系是體積比為1-4︰1-3︰0.5-2︰1-8的脂肪醇：脂肪酸酯︰脂肪醇︰水或體積比為1-4︰1-4︰1-2的氯仿︰脂肪醇︰水；

3）將步驟1）所得到的得到黨參總生物堿用適量的步驟2）所述的下相溶解，制得進樣樣品；

4）取上相作固定相，以20~25ml/min流速填充滿整個逆流色譜儀中的色譜柱，并設定恒溫循環器溫度為25℃；以700~900rpm轉速開啟逆流色譜儀主機后取下相作流動相，并以2~3ml/min流速泵入色譜柱內，待流動相平衡后由進樣閥進樣；根據檢測器圖譜收集目的組分，分別減壓蒸干，乙醇重結晶，得到黨參堿、黨參次堿和管花黨參堿。

本發明所述的方法，其中，所述的步驟4）還包括高效液相色譜檢測步驟，該步驟是將所收集目的組分先進行高效液相色譜檢測，并合并特征峰位置相同、形狀相似的目的組分，再分別減壓蒸干，乙醇重結晶，以減少后續鑒別化合物的工作量；其中所述的高效液相色譜檢測條件為：色譜柱為規格是5μm,4.6mm×250mm的Kromasil?RP-C₁₈，柱溫為25℃；流動相是體積比為5︰95︰0.01的乙腈︰水︰三乙胺；流速為1.0ml/min；紫外檢測器的檢測波長為232nm。

本發明所述的方法，其中所述的乙醇溶液是體積濃度為60~100%的乙醇。

本發明所述的方法，其中所述溶劑體系在25℃下的黏度低，顯著提高了固定相保留值，進而使溶質峰分離度良好（參見圖1～3），所得到黨參堿、黨參次堿和管花黨參堿的純度高達95%以上。

附圖說明

圖1是下述實施例1所得到的高速逆流色譜圖。

圖2是下述實施例2所得到的高速逆流色譜圖。

圖3是下述實施例3所得到的高速逆流色譜圖。

圖4是下述實施例1所得到的組分a的高效液相色譜圖。

圖5是下述實施例1所得到的組分b的高效液相色譜圖。

圖6是下述實施例1所得到的組分c的高效液相色譜圖。

具體實施方式

實施例1

一、黨參生物堿單體的分離