[發明專利]一株固氮紅細菌及其培養方法與應用

有效

• 申請號: 201210156757.0
• 申請日: 2012-05-18
• 公開（公告）號: CN102660484A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發明（設計）人: 肖敏;張金華;盧麗麗;錢新民
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P5/02;C12R1/01
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 王緒銀

1.一株固氮紅細菌（Rhodobacter?azotoformans）Y6菌株，2012年5月8日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中科院微生物研究所，保藏編號為CGMCC?No.6086。

2.權利要求1所述固氮紅細菌（Rhodobacter?azotoformans）Y6的培養方法，其特征在于，步驟如下：

將固氮紅細菌（Rhodobacter?azotoformans）Y6按8~12wt%接種量接種于RCVBN培養基中，在溫度為25~35℃的條件下恒溫光照靜置培養48~72小時，即可；

上述RCVBN培養基組分如下：

MgSO₄·7H₂O?0.2g/L，CaCl₂?0.056g/L，FeSO₄·7H₂O?0.012g/L，Na₂EDTA?0.02g/L，H₃BO₃2.8×10^-3g/L，MnSO₄?1.6×10^-3g/L，ZnSO₄·7H₂O?2.4×10^-4g/L，Na₂MoO₄·2H₂O?7.52×10^-4g/L，Ca(NO3)₂·3H₂O?4×10^-5g/L，生物素1.5×10^-5g/L，尼克酸1×10^-3g/L，對氨基苯甲酸1×10^-3g/L，鹽酸硫胺素1×10^-3g/L，KH₂PO₄?0.6g/L，K₂HPO₄·3H₂O?0.9g/L，DL-蘋果酸4g/L，(NH₄)₂.SO₄?1g/L，pH6.8，115℃滅菌30分鐘。

3.如權利要求2所述的固氮紅細菌Y6的培養方法，其特征在于，所述溫度為30℃。

4.權利要求1所述固氮紅細菌（Rhodobacter?azotoformans）Y6在鏈孢紅素或番茄紅素脫氫反應中的應用。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，步驟如下：

利用PCR技術以固氮紅細菌（Rhodobacter?azotoformans）Y6菌株基因組DNA為模板，采用上游引物D-F：TGCCATATGATGAGACAGATTGTGCCGAA和下游引物D-R：TCGAAGCTTCCTCGATCGCGAAGCAAGGT，擴增類胡蘿卜素crtD基因，將該基因通過表達載體pET-22b在大腸桿菌BL21（DE3）中進行表達，收集重組大腸桿菌細胞超聲波破壁制備重組CrtD粗酶液，再利用重組CrtD粗酶液對鏈孢紅素或番茄紅素進行體外脫氫反應，生成3,4-二脫氫鏈孢紅素或3,4-二脫氫番茄紅素。