[發明專利]含有乙腦E蛋白C末端中和表位基因的融合蛋白及其疫苗

無效

• 申請號: 201210153544.2
• 申請日: 2012-05-15
• 公開（公告）號: CN102676547A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 葛菲菲;王建;劉佩紅;周錦萍;劉健;楊顯超
• 申請（專利權）人: 上海市動物疫病預防控制中心
• 主分類號: C12N15/40
• 分類號: C12N15/40;C12N15/62;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C07K14/18;C07K19/00;A61K39/12;A61K48/00;A61P31/14
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 林煒

1.一種分離的乙腦E蛋白C末端的中和表位基因，其基因序列如SEQ?ID?NO：1所示。

2.權利要求1所述的基因編碼的一種分離的蛋白，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

3.一種融合蛋白，由乙腦E蛋白C末端的中和表位基因和M.T?hsp70基因構成，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：4所示。

4.一種編碼權利要求3所述的融合蛋白的基因，其基因序列如SEQ?ID?NO：3所示。

5.一種載體，其特征在于：含有權利要求1或4所述的基因序列。

6.一種工程菌，其特征在于：含有權利要求1或4所述的基因序列。

7.如權利要求5所述的載體，其特征在于：其基因序列如SEQ?ID?NO：5所示。

8.權利要求5所述的載體表達的蛋白，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：6所示。

9.一種用于預防乙腦的疫苗，其特征在于：含有權利要求2或者3所述的蛋白、或者權利要求5所述的載體表達的蛋白。

10.一種用于預防乙腦的疫苗，其特征在于：含有權利要求6所述的工程菌。

11.權利要求5所述的載體的制備方法，其特征在于：包括一個人工合成乙腦E蛋白C末端的中和表位基因的步驟，一個將中和表位基因克隆到原核表達載體上的步驟，一個擴增hsp70基因的步驟，一個將hsp70基因克隆入原核表達載體中中和表位基因下游、得到融合蛋白表達載體的步驟，一個將融合蛋白表達載體在大腸桿菌中的表達的步驟，一個將表達蛋白純化的步驟。

12.如權利要求11所述的載體的制備方法，其特征在于：在一個人工合成乙腦E蛋白C末端的中和表位基因的步驟中，以SEQ?ID?NO：7所示的序列為正義鏈，以SEQ?ID?NO：8所示的序列為反義鏈，合成乙腦E蛋白C末端的中和表位基因。

13.如權利要求11所述的載體的制備方法，其特征在于：在一個將中和表位基因克隆到原核表達載體上的步驟中，將中和表位基因以EcoRⅠ和Hind???????????????????????????????????????????????酶切后，克隆到原核表達載體pET-32a（+）上，構建表達載體pet-32a-epitope。

14.如權利要求11所述的載體的制備方法，其特征在于：在一個擴增出hsp70基因的步驟中，以人結核桿菌H37Rv標準株的基因組為模板，擴增出M.T?hsp70基因，擴增M.T?hsp70的上游引物序列如SEQ?ID?NO：9所示，下游引物序列如SEQ?ID?NO：10所示。