[發明專利]一株反硝化聚磷菌蠟樣芽孢桿菌H-hrb01及篩選方法和應用

有效

• 申請號: 201210153193.5
• 申請日: 2012-05-17
• 公開（公告）號: CN102827787A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發明（設計）人: 馬放;張曉昕;李昂;孫移鹿;張斯;杜叢;龐長瀧;崔迪
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學宜興環保研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12Q1/04;C02F3/34;C12R1/085
• 代理公司: 宜興市天宇知識產權事務所(普通合伙) 32208
• 代理人: 李妙英

1.一種反硝化聚磷菌蠟樣芽孢桿菌H-hrb01，其特征在于菌株為?Bacillus?cereus?H-hrb01，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日期為2012年3月27日，保藏號為CGMCC?NO.5939。

2.根據權利要求1所述的芽孢桿菌H-hrb01，其特征在于經鑒定為革蘭氏陽性桿菌，內生芽孢，兼性厭氧，在pH?5.0-11.0、10-45℃?條件下生長，菌株寬度為1.0-1.2μm，長為3-5μm，無鞭毛；H-hrb01桿菌在固體培養基上生長為白色不規則菌落，表面光滑，邊緣呈波浪狀。

3.根據權利要求1或2所述反硝化聚磷菌蠟樣芽孢桿菌H-hrb01的篩選方法，其特征在于菌株Bacillus?cereus?H-hrb01是穩定運行的SBR反應器缺氧段末的活性污泥中分離得到，具體篩選步驟如下：

取SBR反應器運行穩定時某周期缺氧段末的活性污泥作為分離用泥，將所取活性污泥制成菌懸液，加入到反硝化培養基中，待培養基凝固后倒置培養皿于30℃恒溫培養箱中培養2～3天后，選取不同形態、菌落清晰的典型菌落，標記并挑取單個菌落在反硝化固體培養基上進行三區劃線分離，重復3～4次至菌落特征一致的單菌落，最后挑取單一菌落，轉接到準備好的試管斜面上以備用，所有操作均在無菌條件下進行；對己分離出來的菌株在富磷培養基中進行吸磷試驗，同時輔助進行硝酸鹽還原產氣試驗及異染顆粒染色（亞甲基藍染色法）和PHB顆粒染色（蘇丹黑染色法）檢驗；對于硝酸還原性為陽性并產氣，菌體內又含有聚磷顆粒或PHB顆粒，在好氧或缺氧條件下能過量吸磷的細菌即為試驗所需的反硝化聚磷菌種屬；

反硝化培養基配制如下：檸檬酸鈉?5.0g/L,?K₂HPO_4?1.0g/L,?KH₂PO_4?1.0g/L,?MgSO₄·7H₂O?0.2g/L,?KNO_3?2.0g/L,?瓊脂15g/L，用NaOH或者HCl調節培養基pH值至7.2，121℃高壓蒸汽滅菌20min；

富磷培養基配制如下（PO₄^3--P為8mg/L）：CH₃COONa·3H₂O?3.23g/L,?KH₂PO₄?35mg/L,?NH₄Cl?305.52mg/L,?MgSO₄·7H₂O?91.26mg/L,?CaCl₂·2H₂O?25.68mg/L,?PIPES?buffer?8.5g/L,?微量元素?2ml/L，瓊脂?15g/L，用NaOH或者HCl調節培養基pH值至7.2，121℃高壓蒸汽滅菌20min；

微量元素的組成如下（1L）：FeCl₃?0.90g，H₃BO₃?0.15g，KI?0.18g，CuSO₄·5H₂O?0.03g，MnCl₂·4H₂O?0.06g，?ZnSO₄·7H₂O?0.12g，CoCl₂?·7H₂O?0.15g，Na₂MoO₄·2H₂O?0.06g，EDTA?10.00g。

4.根據權利要求1所述的反硝化聚磷菌蠟樣芽孢桿菌H-hrb01，其特征在于菌株Bacillus?cereus?H-hrb01在污水生物脫氮除磷工藝中的應用。