[發(fā)明專利]以PAMAM為間隔臂的仿生物特異性免疫吸附材料及其制備方法與應用

有效

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• 申請日: 2012-05-16
• 公開（公告）號: CN102671637A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設計）人: 李光吉;胡小艷
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: B01J20/26
• 分類號: B01J20/26;B01J20/30;B01D15/08;C07K16/00;C07K1/22
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 徐嵩

1.一種以PAMAM為間隔臂的仿生物特異性免疫吸附材料，其特征在于具有如下Sep-PAMAM-AA的化學結構：

其中，Sep代表瓊脂糖凝膠；AA代表氨基酸；n=0,1,2或3；PAMAM為聚酰胺-胺型樹枝狀高分子，所述氨基酸為L-組氨酸、苯丙氨酸或色氨酸。

2.權利要求1所述的以PAMAM為間隔臂的仿生物特異性免疫吸附材料的制備方法，其特征在于包括如下步驟和工藝條件：

（a）疊氮化瓊脂糖凝膠的制備

向環(huán)氧化瓊脂糖中加入疊氮化鈉的水溶液，每克環(huán)氧化瓊脂糖中加入疊氮化鈉3～15mmol，20～60°C反應6～60h后，洗滌抽干得產物；

（b）PAMAM樹枝狀聚合物的合成

在溫度為－10～10°C條件下，向丙烯酸甲酯的甲醇溶液中滴加炔丙胺，丙烯酸甲酯與炔丙胺的摩爾比為5～15∶1，保溫反應0.5～3h后，升溫至20～50°C反應12～50h，將反應產物進行減壓蒸餾，得G?0.5?PAMAM；－10～10°C下，向乙二胺的甲醇溶液中滴加G?0.5PAMAM，乙二胺與G?0.5?PAMAM的摩爾比為10～30∶1，保溫反應0.5～3h后，升溫至20～50°C反應12～50h，將反應產物進行減壓蒸餾得第一代產物G?1.0?PAMAM；

在溫度為－10～10°C條件下，向丙烯酸甲酯的甲醇溶液中滴加G?1.0?PAMAM，丙烯酸甲酯與G?1.0?PAMAM的摩爾比為10～30∶1，保溫反應0.5～3h后，升溫至20～60°C反應15～60h，將反應產物進行減壓蒸餾，得G?1.5?PAMAM；－10～10°C下，向乙二胺的甲醇溶液中滴加G?1.5?PAMAM，乙二胺與G?1.5?PAMAM的摩爾比為30～50∶1，保溫反應0.5～3h后，升溫至20～60°C反應15～60h，將反應產物進行減壓蒸餾得第二代產物G?2.0?PAMAM；

在溫度為－10～10°C條件下，向丙烯酸甲酯的甲醇溶液中滴加G?2.0?PAMAM，丙烯酸甲酯與G?2.0?PAMAM的摩爾比為30～50∶1，保溫反應0.5～3h后，升溫至20～70°C反應18～66h，將反應產物進行減壓蒸餾，得G?2.5?PAMAM；－10～10°C下，向乙二胺的甲醇溶液中滴加G?2.5?PAMAM，乙二胺與G?2.5?PAMAM的摩爾比為70～90∶1，保溫反應0.5～3h后，升溫至20～70°C反應18～66h，將反應產物進行減壓蒸餾得第三代產物G?3.0?PAMAM；

在溫度為－10～10°C條件下，向丙烯酸甲酯的甲醇溶液中滴加G?3.0?PAMAM，丙烯酸甲酯與G?3.0?PAMAM的摩爾比為70～90∶1，保溫反應0.5～3h后，升溫至20～80°C反應24～72h，將反應產物進行減壓蒸餾，得G?3.5?PAMAM；－10～10°C下，向乙二胺的甲醇溶液中滴加G?3.5?PAMAM，乙二胺與G?3.5?PAMAM的摩爾比為150～170∶1，保溫反應0.5～3h后，升溫至20～80°C反應24～72h，將反應產物進行減壓蒸餾得第四代產物G?4.0?PAMAM；

（c）氨基酸甲酯鹽酸鹽的制備

將氨基酸置于甲醇溶液中，加入三甲基氯硅烷，所述三甲基氯硅烷與氨基酸的摩爾比為1～3∶1，回流至溶液澄清后旋蒸干燥；所述氨基酸為L-組氨酸、苯丙氨酸或色氨酸；

（d）氨基酸修飾的PAMAM的制備

將氨基酸甲酯鹽酸鹽溶于水中，并加入三乙胺及第一~第四代PAMAM產物中任意一種的水溶液，氨基酸甲酯鹽酸鹽、三乙胺與第一~第四代PAMAM產物的摩爾比為1～10∶1～10∶1；磁力攪拌下20～90°C反應24～96h，透析并冷凍干燥得氨基酸修飾的PAMAM產物，表示為PAMAM-AA；所述氨基酸甲酯鹽酸鹽為組氨酸甲酯鹽酸鹽、苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽或色氨酸甲酯鹽酸鹽；所述第一~第四代PAMAM產物為G?1.0?PAMAM、G?2.0PAMAM、G?3.0?PAMAM和G?4.0?PAMAM；

（e）點擊法制備以PAMAM為間隔臂的免疫吸附材料

將氨基酸修飾的PAMAM產物溶于水后，加入疊氮化瓊脂糖凝膠，每克疊氮化瓊脂糖凝膠加入1～10mmol氨基酸修飾的PAMAM產物，然后依次加入五水硫酸銅和抗壞血酸鈉作催化劑，五水硫酸銅、抗壞血酸鈉與氨基酸修飾的PAMAM產物的摩爾比為0.01～0.05∶0.02～0.1∶1；并于20～90°C反應24～96h，洗滌抽干得目標產物Sep-PAMAM-AA。