[發明專利]磁性納米粘土載體固定化酶及其再生的方法

無效

• 申請號: 201210152107.9
• 申請日: 2012-05-17
• 公開（公告）號: CN102649954A
• 公開（公告）日: 2012-08-29
• 發明（設計）人: 李彥鋒;趙光輝;王建芝;金新亮
• 申請（專利權）人: 蘭州大學
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N9/34
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 李艷華

1.磁性納米粘土載體固定化酶，包括固定對象為糖化酶和相應固定化酶的載體，并以共價偶聯法為固定化方法制成，其特征在于：所述載體為磁性納米Fe₃O₄粘土復合材料，該磁性納米Fe₃O₄粘土復合材料由磁性Fe₃O₄納米粒子和納米粘土材料組成，且磁性Fe₃O₄納米粒子有序地組裝在所述納米粘土上。

2.如權利要求1所述的磁性納米粘土載體固定化酶，其特征在于：所述磁性納米Fe₃O₄粘土復合材料是指首先將FeCl₃·6H₂O以1：20~1：50的料液重量體積比溶解于乙二醇中形成澄清溶液；然后將NaAc、聚乙二醇加入到所述澄清溶液中，其次將鹽酸活化的納米粘土加入到所述澄清溶液中，超聲分散1~5h，得到混合液；最后將所述混合液加入到聚四氟乙烯襯里的不銹鋼反應釜中，維持160~210℃反應5~24h即得；其中所述NaAc與所述澄清溶液的重量體積比為1：7~1：18；所述聚乙二醇與所述澄清溶液的重量體積比為1：20~1：50；所述鹽酸活化的納米粘土與所述澄清溶液的重量體積比為1：60~1：150。

3.如權利要求2所述的磁性納米粘土載體固定化酶，其特征在于：所述鹽酸活化的納米粘土是指將納米粘土按1：20~30的料液重量體積比放入濃度為1~3?M的HCl?溶液中，在20~40℃溫度下超聲0.5~2?h進行活化后，經離心分離并洗滌至上清液呈中性，再離心分離后得到沉淀物，該沉淀物經真空干燥至恒重后研磨、過30~60μm篩子即得。

4.如權利要求3所述的磁性納米粘土載體固定化酶，其特征在于：所述納米粘土為凹凸棒、高嶺土、蒙脫土中的任意一種。

5.如權利要求1所述的磁性納米粘土載體固定化酶的制備方法，包括以下步驟：

⑴將磁性納米Fe₃O₄粘土復合材料以1：40~1：80的料液重量體積比浸泡在二甲苯溶液中2~4h，使其充分溶脹，然后在攪拌下將γ-氨基丙基三乙氧基硅烷加入到所述二甲苯溶液中；在90~130℃下油浴加熱回流，且N₂保護下反應6~15h，反應結束后乙醇洗滌三次，經磁分離后得到沉淀物，該沉淀物經真空干燥至恒重，得到改性的磁性納米Fe₃O₄粘土復合材料，記為Fe₃O₄粘土-NH₂；其中所述γ-氨基丙基三乙氧基硅烷與所述二甲苯溶液的重量體積比為1：8~1：12；

⑵在質量濃度為2~10%的戊二醛溶液中加入所述Fe₃O₄粘土-NH₂，于室溫下反應2~8h；然后進行磁分離，得到沉淀物，該沉淀物經蒸餾水洗滌數次去除未反應的戊二醛；最后用濃度為50mM、pH值為5.5的醋酸緩沖溶液洗滌沉淀物，并將該沉淀物記作Fe₃O₄粘土-GA；所述Fe₃O₄粘土-NH₂與所述戊二醛溶液的重量體積比為1：30~60；

⑶將所述Fe₃O₄粘土-GA載體按1：10~20的料液重量體積比加入到濃度為50mM、pH值為5.5、糖化酶含量為0.1~0.6?mg的糖化酶醋酸緩沖液中，在20~40℃反應2~8小時進行酶的固定化；固定化后經離心分離并經濃度為50mM、pH值為5.5的醋酸緩沖溶液洗滌兩次后，即得固定化酶；

⑷所述固定化酶放置在在4℃下保存即可。