[發(fā)明專利]一種地黃組培快繁方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210151744.4
• 申請日: 2012-05-17
• 公開（公告）號: CN102657090A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 林文雄;李振方;張重義;楊燕秋;李吉;戴林泉
• 申請（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

技術(shù)領(lǐng)域

??????本發(fā)明涉及一種地黃組培快繁方法。

背景技術(shù)

　地黃(Rehmannia?glutinosa?Libosch.)是玄參科多年生草本植物，主要分布于我國河北、河南、山東、山西、江蘇、湖北等省區(qū)，在日本、朝鮮等地也見地黃栽培品種。地黃在我國已有1500年的栽培歷史，是最早進行栽培的藥用植物之一。其中尤以河南的懷地黃“處后天下之中，名產(chǎn)地黃，河南地厚水浮，得中央濕土之氣而生內(nèi)含潤澤”，品質(zhì)最優(yōu)，經(jīng)各種炮制方法入藥后藥效奇佳，素有“懷參”之稱，是我國著名的“四大懷藥”之一，也是我國中醫(yī)藥體系中最為常用的中藥材之一。

但地黃卻存在著非常嚴重的連作障礙（或復(fù)種連作）問題，其忌地年限需8-10年，即種植一茬地黃需要間隔約8-10年的時間方能再種。且地黃為高度的雜合體,?親本自交不親和，其雜交后所產(chǎn)子代會出現(xiàn)嚴重性狀分離，又由于地黃種子繁殖幼苗生長矮小不能進行正常膨大，所以長期以來均以地黃塊根為材料，進行倒栽留種的無性繁殖。但經(jīng)過多代留種栽培后，塊根作為靠營養(yǎng)繁殖材料極易遭受病毒侵染，易感染細菌和真菌病害，在多種自然因素的影響下導(dǎo)致地黃表現(xiàn)出更為嚴重的連作障礙問題，嚴重制約了地黃產(chǎn)業(yè)的生產(chǎn)和發(fā)展。

近年來，地黃的離體培養(yǎng)及快速繁殖體系的研究逐漸增多，逐步建立高效的再生系統(tǒng)，從一定程度上能緩解地黃品種退化問題，而且通過誘導(dǎo)地黃葉片、塊根、頂芽等組織作為外殖體材料，獲得脫病毒植株是規(guī)避地黃病毒病的有效途徑。但傳統(tǒng)的地黃組織培養(yǎng)方法需經(jīng)過脫分化形成愈傷組織，再分化誘導(dǎo)成苗后，經(jīng)生根誘導(dǎo)和煉苗移栽后才可成活，所用步驟較為繁瑣，傳統(tǒng)地黃組培方法培獲得的幼苗生長脆弱，移栽后成活率低。

傳統(tǒng)地黃組織培養(yǎng)所用外殖體材料多用地黃葉片、塊根、頂芽，雖然取材容易，但操作時外殖體的消毒較為復(fù)雜，不易控制消毒時間。消毒時間過長，雖然污染率降低，但不利于芽的無菌萌發(fā)，縮短消毒時間則會導(dǎo)致外殖體材料的污染率加大。?

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發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種以地黃根生芽為外植體材料的地黃組培快繁方法，能簡化組織培養(yǎng)操作過程，降低組織培養(yǎng)成本。

本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明提供的一種地黃組培快繁方法，包括下列步驟：

（1）采集地黃塊根，用自來水沖洗干凈后，于暗室培養(yǎng)，待塊根上芽眼長出新芽，將新芽由塊根上切下；經(jīng)消毒、無菌水沖洗，保留新芽頂端長度為0.5-1厘米，獲得根生芽作為地黃外殖體材料；

（2）將根生芽接種于成苗誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，置入25±2℃培養(yǎng)室中進行成苗誘導(dǎo)；

（3）將誘導(dǎo)成苗后的地黃幼苗帶葉切成小段，接種于叢生苗快繁培養(yǎng)基上培養(yǎng)，獲得叢生苗；

（4）取帶有2個莖節(jié)的叢生苗接種于MS生根培養(yǎng)基中，進行生根誘導(dǎo)；

（5）挑選長勢旺盛的生根苗，經(jīng)煉苗培養(yǎng)或不經(jīng)過煉苗直接將生長健壯的小苗取出，自來水沖洗根部瓊脂后，用0.1%的多菌靈溶液浸泡消毒后，移栽于基質(zhì)中保濕培養(yǎng)。

所述步驟（1）的消毒，其具體操作為：先用?75?%酒精消毒25-35秒，無菌水沖洗兩遍，再用0.?05?%的HgCL₂溶液消毒8-10分鐘，無菌水沖洗三遍。

所述步驟（2）成苗誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA?0.8-1.2?mg/L+NAA?0.05-0.12g/L；成苗誘導(dǎo)的條件為：每日光照時間12-13h，光照強度為4.17?±?0.18×10³?lux。

所述步驟（3）叢生苗快繁培養(yǎng)基為MS+6-BA?0.2-0.4?mg/L?+NAA?0.1-0.3mg/L。

所述步驟（4）MS生根培養(yǎng)基為MS+?PP₃₃₃?0.1?-0.3?mg/L。

眾所周知，組織培養(yǎng)的首要步驟是篩選外殖體材料，適宜的外殖體材料不僅能有利于消毒過程的簡化，提高成苗誘導(dǎo)效率，還能為后續(xù)快繁過程培育出生長良好的叢生苗材料。

本發(fā)明以地黃根生芽為外殖體材料，與地黃塊根相比，根生芽在暗處出芽后生長較快、出芽較長、暴露于空氣的時間較短，有利于消毒處理。同樣消毒時間處理后，出芽率與被污染率均優(yōu)于地黃塊根和地黃頂芽。優(yōu)化后的成苗誘導(dǎo)培養(yǎng)基可以在較短時間內(nèi)獲得地黃無菌苗，不必像以地黃葉片作為外殖體需經(jīng)過脫分化誘導(dǎo)愈傷后才可誘導(dǎo)成苗。因此本發(fā)明所優(yōu)選的地黃塊根在暗處萌發(fā)后的根生芽可作為地黃組織培養(yǎng)的良好外殖體材料。