[發明專利]屬于埃希氏菌屬的產L-蘇氨酸細菌以及生產L-蘇氨酸的方法

在審

• 申請號: 201210151630.X
• 申請日: 2004-12-03
• 公開（公告）號: CN102816804A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發明（設計）人: 瓦萊里.Z.阿克維迪安;埃卡特里納.A.薩夫拉索瓦;阿拉.M.卡普蘭;安德雷.O.洛巴諾夫;尤里.I.科茲洛夫
• 申請（專利權）人: 味之素株式會社
• 主分類號: C12P13/08
• 分類號: C12P13/08;C12R1/185
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 封新琴

本申請是申請日為2004年12月03日，申請號為2004800358213（國際申請號為PCT/JP2004/018436），名稱為“屬于埃希氏菌屬的產L-蘇氨酸細菌以及生產L-蘇氨酸的方法”的發明專利申請的分案申請。?

技術領域

本發明涉及通過發酵生產L-氨基酸的方法，更具體地涉及有助于這種發酵的源自大腸桿菌(Escherichia?coli)的基因。所述基因可以用來提高L-氨基酸生產，具體地，例如，用來提高L-蘇氨酸的生產。?

背景技術

傳統上，L-氨基酸是通過利用獲自天然來源的微生物菌株或其突變體的發酵方法進行工業生產的，這些菌株受到修飾以提高L-氨基酸的產量。?

已經報道過許多提高L-氨基酸產量的技術，包括用重組DNA轉化微生物(例如參見美國專利號4,278,765)。其它提高產量的技術包括提高涉及氨基酸生物合成的酶的活性和/或使所得的L-氨基酸的反饋抑制的靶酶脫敏(例如參見WO?95/16042或美國專利4,346,170;5,661,012和6,040,160)。?

可用于發酵生產L-蘇氨酸的菌株是已知的，其中，某些菌株中涉及L-蘇氨酸生物合成的酶的活性提高(美國專利5,175,107;5,661,012;5,705,371;5,939,307;EP0219027)，某些菌株耐受化學藥物如L-蘇氨酸及其類似物(WO0114525A1，EP301572A2，US?5,376,538)，某些菌株中受產物L-氨基酸或其副產物的反饋抑制的靶酶被脫敏(美國專利5,175,107;5,661,012)，某些菌株中蘇氨酸降解酶失活(美國專利5,939,307;6,297,031)。?

已知的產蘇氨酸菌株VKPM?B-3996(美國專利5,175,107和5,705,371)是目前已知的最好的產蘇氨酸菌。該菌株為大腸桿菌(Escherichia?coli)，于1987年4月7日保藏于俄羅斯國立工業微生物保藏中心(VKPM)(Dorozhny?proezd.1，Moscow?113545，Russian?Federation)，保藏號B-3996。為了構建菌株VKPMB-3996，將下述幾種突變和質粒導入親本大腸桿菌K-12(VKPM?B-7)。突變?體thrA基因(突變thrA442)編碼耐受蘇氨酸的反饋抑制的天冬氨酸激酶高絲氨酸脫氫酶Ⅰ。突變體ilvA基因(突變ilvA442)編碼活性降低的蘇氨酸脫氨酶，其導致異亮氨酸生物合成的速率降低并且導致異亮氨酸饑餓的滲漏(leaky)表型。在包含ilvA442突變的細菌中，thrABC操縱子的轉錄不被異亮氨酸所抑制，因此對于蘇氨酸生產非常有效。tdh基因的失活導致蘇氨酸降解被阻止。將蔗糖同化作用的遺傳決定子(scrKYABR基因)轉移給所述菌株。為了提高控制蘇氨酸生物合成的基因的表達，將含有突變體蘇氨酸操縱子thrA442BC的質粒pVIC40導入中間菌株TDH6。該菌株發酵期間積聚的L-蘇氨酸的量可以高達85g/l。?