[發(fā)明專利]一種Y染色體STR基因座熒光檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210149632.5
• 申請(qǐng)日: 2012-05-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102676676A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉超;劉宏;徐曲毅;李越;葛斌文;陳林麗;曹淵;鄭衛(wèi)國(guó)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州市刑事科學(xué)技術(shù)研究所;無(wú)錫中德美聯(lián)生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 林名欽

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因座熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增檢驗(yàn)系統(tǒng)，具體涉及一種Y染色體STR基因座熒光檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用。?

背景技術(shù)

短串聯(lián)重復(fù)序列基因座（STR）是目前普遍應(yīng)用的遺傳標(biāo)記，是2-6個(gè)bp長(zhǎng)的串聯(lián)重復(fù)序列，其長(zhǎng)度在幾十到幾百bp之間。這種串聯(lián)重復(fù)形成的DNA序列可以產(chǎn)生數(shù)以億計(jì)的基因型組合，而每一種組合在群體中出現(xiàn)的頻率都非常低，也就是說(shuō)，STR基因座具有極高的個(gè)體鑒定能力，所以常作為遺傳標(biāo)記而被用于DNA分析技術(shù)中法醫(yī)個(gè)體識(shí)別、親緣關(guān)系鑒定，同時(shí)也是DNA數(shù)據(jù)庫(kù)建立的主流技術(shù)。90年代初STR基因座多態(tài)性的發(fā)現(xiàn)，特別是STR基因座具有片段小容易擴(kuò)增，適宜于檢驗(yàn)微量和降解檢材，而且各基因座的擴(kuò)增條件相似而能夠復(fù)合擴(kuò)增，因而具有靈敏、準(zhǔn)確、快速、信息量大等優(yōu)點(diǎn)。尤其是在建立DNA數(shù)據(jù)庫(kù)方面，STR復(fù)合擴(kuò)增技術(shù)具有極大的優(yōu)越性。?

Y染色體是性染色體的一種，屬于近端著絲粒染色體。根據(jù)遺傳方式不同可以將其分為兩個(gè)區(qū)，即位于Y染色體兩端的擬常染區(qū)（pseudoautosomal?region,?PAR）和Y特異區(qū)。減數(shù)分裂時(shí)，擬常染區(qū)要與X染色體進(jìn)行交換重組，而Y特異區(qū)則不發(fā)生交換，由父親獨(dú)立向下遺傳給兒子，并且存有父系祖先的突變記錄，是形成Y特異區(qū)多態(tài)性的基礎(chǔ)。Y染色體突變率不超過(guò)常染色體，Y染色體的遺傳標(biāo)記位于非重組區(qū)，也就是說(shuō)整個(gè)非重組區(qū)相當(dāng)于一個(gè)遺傳標(biāo)記，因此Y?染色體遺傳標(biāo)記的個(gè)人識(shí)別能力和親權(quán)鑒定能力不能像常染色體那樣使用相乘原則，個(gè)人識(shí)別和親權(quán)鑒定的評(píng)估十分有限。但是在國(guó)際慣例里面必須有三個(gè)以上基因座不同才能否認(rèn)有血緣關(guān)系。為了達(dá)到足夠的排除概率，法醫(yī)DNA分析必須盡可能增加更多的Y染色體遺傳標(biāo)記。在法醫(yī)鑒定領(lǐng)域，DNA分析主要依賴商業(yè)化的試劑盒進(jìn)行。其中Applied?Biosystems公司在2004年秋發(fā)布的包含17個(gè)Y-STR基因座的Yfiler^TM試劑盒，包括DYS19、DYS385a/b?、DYS389Ⅰ、DYS389Ⅱ、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393、DYS437、DYS438、DYS439、DYS456、DYS458、DYS635、Y?GATA?H4、DYS448，是目前可復(fù)合擴(kuò)增Y-STR最多的商品化試劑盒和無(wú)錫中德美聯(lián)生物技術(shù)有線公司在2011年研發(fā)的Y18試劑盒在Yfiler^TM的基礎(chǔ)上增加了DYS447。這些現(xiàn)有試劑盒主要是按照歐洲人群（主要為白人群體）統(tǒng)計(jì)選擇的基因座位點(diǎn)，其中不少基因座的多態(tài)性在中國(guó)人群中比較低，如DYS391在中國(guó)人群中多態(tài)性小于0.4，因而造成了個(gè)體識(shí)別能力低，在法醫(yī)鑒定的實(shí)際應(yīng)用中會(huì)遇到瓶頸，比如嫌疑人與不同幾個(gè)家系的成員分型匹配，造成無(wú)法排查的情況，浪費(fèi)了大量的人力物力。且由于Y染色體容易存在缺失的情況，造成基因座的丟失本應(yīng)是同一個(gè)家系的無(wú)法認(rèn)定，誤導(dǎo)了偵破方向。?

因此，開(kāi)發(fā)一種基因座多態(tài)性高和能同時(shí)檢測(cè)更多基因座的試劑盒，成為親子鑒定、法醫(yī)檢測(cè)家系排查等迫切需要。且這個(gè)試劑盒與現(xiàn)有Y染色體STR的檢測(cè)試劑盒，比如ABI的Yfiler試劑盒聯(lián)用進(jìn)行Y染色體STR基因座的檢測(cè)，能夠明顯地提高Y染色體DNA檢驗(yàn)系統(tǒng)的累計(jì)個(gè)體識(shí)別能力和累積非父排除率，更加符合DNA檢驗(yàn)的技術(shù)要求。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種Y染色體STR基因座熒光檢測(cè)試劑盒。?

本發(fā)明的另一目的是提供上述Y染色體STR基因座熒光檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用。?

本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)上述目的：?

根據(jù)過(guò)去十幾年針對(duì)中國(guó)人群Y染色體的研究，篩選出針對(duì)中國(guó)男性GD(gene?diversity)數(shù)值高的Y染色體STR基因座，分別設(shè)計(jì)了其相對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增引物，可同時(shí)分析人Y染色體DNA?24個(gè)基因座多態(tài)性。所述24個(gè)基因座見(jiàn)下表1：

表1

?根據(jù)上述24個(gè)基因座，發(fā)明了一種Y染色體STR基因座熒光檢測(cè)試劑盒，包含以下24個(gè)基因座的擴(kuò)增引物核苷酸序列（見(jiàn)表2）：

表2

????由于復(fù)合擴(kuò)增體系中基因座數(shù)目較多，相互之間會(huì)有競(jìng)爭(zhēng)影響，因此各基因座的相對(duì)平衡控制難度加大，通過(guò)多次反復(fù)實(shí)驗(yàn)，調(diào)節(jié)引物濃度與配比，終達(dá)到平衡。作為一種優(yōu)選方案，上述Y染色體STR基因座熒光檢測(cè)試劑盒中各基因座的擴(kuò)增引物濃度優(yōu)選表2中的濃度。