[發明專利]蛋白質CTSF在制備診斷胃癌的試劑中的應用及診斷試劑盒

有效

• 申請號: 201210149082.7
• 申請日: 2012-05-14
• 公開（公告）號: CN102680706A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 楊麗娜;陶生策;劉炳亞;王靖方;郭書娟;朱正綱;李建芳;燕敏
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 胡晶

1.蛋白質CTSF在制備診斷胃癌的試劑中的應用。

2.一種制備診斷胃癌疾病的診斷試劑盒，其特征在于，該試劑盒采用現在臨床廣泛使用的ELISA技術，應用間接法定性檢測人血清中抗蛋白質CTSF的IgG抗體；具體是：用純化的人蛋白質CTSF抗原通過包被緩沖液稀釋后包被在酶標板上的微孔內制成固相抗原，加入封閉液；將標準品與待測血清樣品用樣品稀釋液稀釋后加入各自的抗原測定孔中，每孔加入含有辣根過氧化物酶（HRP）標記的anti-Human?IgG抗體的酶標試劑，形成CTSF-抗體-酶標二抗復合物，經洗滌液徹底洗滌后加酶底物溶液顯色,?酶底物溶液反應時間到后加入酸性終止液；所述酶底物溶液在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色，利用顏色的深淺來檢測樣品中抗蛋白質CTSF的IgG抗體的水平。

3.根據權利要求1所述的制備診斷胃癌疾病的診斷試劑盒，其特征在于，所述純化的人蛋白質CTSF是從釀酒酵母中過量表達，親和純化而得到，濃度為50?μg/mL。

4.根據權利要求1所述的制備診斷胃癌疾病的診斷試劑盒，其特征在于，所述標準品包括0?U/mL標準血清1和100?U/mL標準血清2，分別為正常人血清和CTSF抗體為陽性的血清稀釋于樣品稀釋液中。

5.根據權利要求1所述的制備診斷胃癌疾病的診斷試劑盒，其特征在于，所述酶底物溶液包括：顯色劑A：500?mL溶液中含醋酸鈉13.6?g，檸檬酸1.6?g，30?%雙氧水0.3?mL、顯色劑B：500?mL溶液中含TMB?350?mg，DMSO?20?mL，檸檬酸·H₂O?5.1?g。

6.根據權利要求1所述的制備診斷胃癌疾病的診斷試劑盒，其特征在于，所述包被緩沖液為0.05?M?pH?9.6?的碳酸鹽緩沖液，即1升溶液中含1.59?g?Na₂CO₃，2.93?g?NaHCO₃。

7.根據權利要求1所述的制備診斷胃癌疾病的診斷試劑盒，其特征在于，所述封閉液為0.5?%?BSA?的0.01?mol/L?pH?7.4磷酸鹽-?NaCl緩沖液（PBS）溶液，即1升溶液中含5?g牛血清白蛋白（BSA），8?g?NaCl，0.2?g?KH₂PO₄，2.9?g?Na₂HPO₄·12H₂0，0.2?g?KCl。

8.根據權利要求1所述的制備診斷胃癌疾病的診斷試劑盒，其特征在于，所述樣品稀釋液為0.01mol/L?pH?7.4磷酸鹽-?NaCl緩沖液（PBS）。

9.根據權利要求1所述的制備診斷胃癌疾病的診斷試劑盒，其特征在于，所述洗滌液為0.01?mol/L?pH?7.4磷酸鹽-Nacl緩沖液(PBST)，PBST內含0.05?%?Tween-20，即1升溶液中含8?g?NaCl，0.2?g?KH₂PO₄，2.9?g?Na₂HPO₄·12H₂0，0.2?g?KCl，0.5?mL?Tween-20。

10.根據權利要求1所述的制備診斷胃癌疾病的診斷試劑盒，其特征在于，所述終止液為2?mol/L?H₂SO₄溶液。

11.根據權利要求2至10中任一所述的制備診斷胃癌疾病的診斷試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中的試劑均可以加入防腐劑，以便于保存。