[發明專利]C端苯丙氨酸對位氨基化修飾的內嗎啡肽-1類似物及其制備和應用

無效

• 申請號: 201210147745.1
• 申請日: 2012-05-14
• 公開（公告）號: CN102659920A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發明（設計）人: 王銳;梁媛;王一青
• 申請（專利權）人: 蘭州大學
• 主分類號: C07K5/107
• 分類號: C07K5/107;A61K38/07;A61P29/00
• 代理公司: 甘肅省知識產權事務中心 62100
• 代理人: 張英荷

1.一種C端苯丙氨酸對位氨基化修飾的內嗎啡肽-1類似物，其結構式如下：

。

2.如權利要求1所述C端苯丙氨酸對位氨基化修飾的內嗎啡肽類似物的制備方法，包括以下工藝步驟：

（1）Boc-Phe(4-NO₂)-NH₂的合成

將叔丁氧羰基保護的對硝基苯丙氨酸充分溶解于四氫呋喃中，加入叔丁氧羰基保護的對硝基苯丙氨酸摩爾量1.0~1.5倍的1-羥基苯并三唑，攪拌使其完全溶解，待溶液的顏色變成紅褐色后，再加入叔丁氧羰基保護的對硝基苯丙氨酸摩爾量1~4倍量的N,N-二異丙基乙胺，攪拌反應12~36小時，旋蒸除去四氫呋喃后溶解于水中，乙酸乙酯萃取，有機相依次用檸檬酸、飽和的碳酸氫鈉、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮，得到的白色固體，即為Boc-Phe(4-NO₂)-NH₂；?

（2）單芐氧羰基化的脒基吡唑鹽酸鹽的合成?

將脒基吡唑鹽酸鹽完全溶解于二氯甲烷中，加入脒基吡唑鹽酸鹽摩爾量2~6倍量的芐氧羰基氯，攪拌反應10~30分鐘，再加入脒基吡唑鹽酸鹽摩爾量3~8倍量的三乙胺，于0~5℃下攪拌反應1~3小時，升溫至室溫，攪拌10~20小時，旋蒸除去二氯甲烷，用乙酸乙酯萃取，用飽和的氯化鈉溶液洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮，重結晶，得到的白色固體即為單芐氧羰基化的脒基吡唑鹽酸鹽；

（3）雙芐氧羰基化的脒基吡唑鹽酸鹽的合成

在惰性氣體保護下，于0~5℃下，將氫化鈉充分溶解于四氫呋喃中，依次加入單芐氧羰基化的脒基吡唑鹽酸鹽、芐氧羰酰琥珀酰亞胺，攪拌反應30~48小時，用冰水猝滅，旋蒸除去四氫呋喃后，用乙酸乙酯萃取，依次用檸檬酸、飽和的碳酸氫鈉、飽和食鹽水洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮，得到油狀混合物，油狀混合物經純化，得到雙芐氧羰基化的脒基吡唑鹽酸鹽晶體；

（4）芐氧羰基化的酪氨酸羧基端的活化

于0~5℃下，將芐氧羰基保護的酪氨酸溶解于四氫呋喃中，加入芐氧羰基保護的酪氨酸摩爾量1~3倍的N-羥基琥珀酰亞胺和芐氧羰基保護的酪氨酸摩爾量1~3倍的N,N'-二環己基碳二亞胺，攪拌使其充分溶解，繼續攪拌反應10~20分鐘，升溫至室溫，反應12~18小時，抽濾，除去生成的二環己基脲，得到活化濾液；

（5）接肽反應

將Cbz保護的酪氨酸摩爾量1~4倍的丙氨酸溶于飽和碳酸氫鈉溶液中，再將上述得到的活化濾液加入其中，于0~5℃下攪拌反應20~60分鐘，升溫至室溫，反應12~18小時；旋蒸除去四氫呋喃，用乙酸乙酯萃取，除去有機相，保留水相；于0~5℃下調pH=2~6，然后用乙酸乙酯萃取，有機相依次用質量濃度5~10%的檸檬酸水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮，得到淡黃色的油狀液體；柱層析分離，得到無色的油狀物，即為氮端的二肽化合物；

（6）H-Tyr-D-Ala-OH的而成

將氮端的二肽化合物溶于無水甲醇中，加入活性鈀碳，室溫攪拌下，通氫氣反應0.5~2h；真空抽濾除去活性鈀碳，減壓濃縮，得無色油狀物即為二肽化合物H-Tyr-D-Ala-OH；

（7）Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-OH的合成

將步驟（3）合成的雙芐氧羰基化的脒基吡唑鹽酸鹽，步驟（6）合成的H-Tyr-D-Ala-OH以1:1~1:3的摩爾比加入到N-N-二甲基甲酰胺中，再加入雙芐氧羰基化的脒基吡唑鹽酸鹽摩爾量4~8倍的三乙胺，于0~5℃下攪拌反應25~35分鐘，升溫至室溫，反應48~96小時；用乙酸乙酯萃取，有機相依次用5~10%的檸檬酸水溶液、飽和的食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮，得到淡黃色油狀液體；柱層析分離，得到無色油狀物，即為Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-OH；

（8）Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-OH的合成

于0~5℃下，將Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-OH溶解于四氫呋喃中，加入Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-OH摩爾量1~3倍的N,N'-二環己基碳二亞胺，攪拌使其充分溶解，繼續攪拌反應10~20分鐘，升溫至室溫，反應12~18小時，抽濾，除去生成的二環己基脲，得到活化濾液；

將Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-OH摩爾量1~4倍的甘氨酸溶于飽和碳酸氫鈉溶液中，再將上述活化濾液加入其中，于0~5℃下攪拌反應20~60分鐘，升溫至室溫，反應12~18小時；旋蒸除去四氫呋喃，用乙酸乙酯萃取，除去有機相，保留水相；于0~5℃下調pH=2~6，然后用乙酸乙酯萃取，有機相依次用質量濃度5~10%的檸檬酸水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮，得到淡黃色的油狀液體；柱層析分離，得到無色的油狀物，即為氮端的三肽化合物Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-OH；

（9）脫Boc-Phe（4-NO₂）-NH₂氨基酸的叔丁氧羰基

于0~5℃下,將步驟（1）合成的氨基酸Boc-Phe（4-NO₂）-NH₂溶于二氯甲烷，之后加入氨基酸Boc-Phe（4-NO₂）-NH₂摩爾量2~6倍量的三氟乙酸，攪拌反應0.5~2小時，濃縮，得到白色的固體，用乙醚結晶，得到白色固體，即為氨基酸H-Phe（4-NO₂）-NH₂；

（10）Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-Phe(4-NO₂)-NH₂的合成

于0~5℃下，將Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-OH溶解于四氫呋喃中，加入Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-OH摩爾量1~3倍的N,N'-二環己基碳二亞胺，攪拌使其充分溶解，繼續攪拌反應10~20分鐘，升溫至室溫，反應12~18小時，抽濾，除去生成的二環己基脲，得到活化濾液；

將Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-OH摩爾量1~4倍的氨基酸H-Phe（4-NO₂）-NH₂溶于飽和碳酸氫鈉溶液中，再將上述活化濾液加入其中，于0~5℃下攪拌反應20~60分鐘，升溫至室溫，反應12~18小時；旋蒸除去四氫呋喃，用乙酸乙酯萃取，然后用乙酸乙酯萃取，有機相依次用質量濃度5~10%的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉溶液，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮，得到淡黃色的油狀液體；柱層析分離，得到白色固體，即為四肽化合物Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-Phe(4-NO₂)-NH₂；

（11）GU-Tyr-D-Ala-Gly-Phe(4-NH₂)-NH₂的合成

將四肽化合物Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-Phe(4-NO₂)-NH₂溶于無水甲醇中，加入活性鈀碳，室溫攪拌下，通氫氣反應0.5~2h；真空抽濾除去活性鈀碳，減壓濃縮，得白色護體即為四肽化合物Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-Phe(4-NO₂)-NH。