[發明專利]制備棘白菌素B母核的方法

有效

• 申請號: 201210146480.3
• 申請日: 2012-05-11
• 公開（公告）號: CN103387606A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 李繼安;陳詳;姚道明;林慧敏;沈劍鋒;姚黎棟;張菲菲;董華成;黃娟娟;尚秀婷
• 申請（專利權）人: 浙江震元制藥有限公司;上海醫藥工業研究院
• 主分類號: C07K7/56
• 分類號: C07K7/56
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 陳長會;謝燕軍

技術領域

本發明涉及抗真菌藥物的開發，具體地，本發明涉及一種制備阿尼芬凈前體棘白菌素B母核的方法。

背景技術

由于廣譜抗真菌藥物的大量使用，真菌耐藥性逐漸增強。在一些免疫抑制患者包括HIV感染者、器官移植者以及那些患有其它疾病而正進行免疫治療的患者中，真菌感染無論是其發生頻率還是感染種類都在不斷地增加。因此，迫切需要尋找新的安全有效的抗真菌藥物。

20世紀70年代發現的棘白菌素類藥物為一組天然產物，結構由相似的環狀多肽核心和不同的脂肪酸側鏈組成，通過非競爭性作用機制抑制β-(1，3)-D-葡聚糖的合成，導致細胞壁葡聚糖的排空、滲透不穩定以及真菌細胞的溶解而發揮其抗真菌作用。其作用機制獨特，不良發應率低，作為一種可殺死真菌的藥物表現出抗菌譜廣、活性強的特點，是治療免疫抑制患者和免疫正常患者真菌感染的重要選擇藥物。棘白菌素類抗生素主要有三種類型：B，C和D。其中棘白菌素B(Echinocandin?B，簡稱為ECB)是最主要的類型。ECB由于酰基側鏈的存在，使其具有一定的溶血毒性。以ECB為先導化合物進行結構改造，可以得到一些具有臨床應用價值的化合物，如卡帕芬凈(Caspofungin，MK991)、米卡芬凈(Micafungin，FK463)、阿尼芬凈(Anidulafungin，LY303366)。將ECB的側鏈通過脫酰基化斷開后生成棘白菌素B母核(Echinocandin?B?Nucleus，簡稱為ECBN)，再接上修飾基團構成阿尼芬凈，此藥已經上市，表現出了優秀的臨床效果，市場潛力巨大。

ECBN是通過游動放線菌對棘白菌素B進行脫酰基化得到的，文獻DEACYLATION?OF?ECHNOCANDIN?B?BY?ACTINOPLANES?UTAHENSIS(MAR?1989THE?JOURNAL?OF?ANTIBIOTICS)介紹了其分離純化的方法：首先用HP-20大孔吸附樹脂對轉化液進行初步分離，然后用反相HPLC進行精制，此法能夠得到高純度的ECBN，但該工藝對設備要求高，制備成本巨大，很難進行規模化生產。

發明內容

鑒于現有技術的不足，本發明提供一種新的制備棘白菌素B母核的方法，所述方法工藝簡單，設備要求低，適合大規模的工業生產，具有很好的商業價值。尤其是，本發明方法能將棘白菌素B母核的最終純度提高到95％以上。

因此，本發明涉及制備棘白菌素B母核的方法，所述方法包括如下步驟：

1)棘白菌素B轉化完成后抽濾，取濾液，過酸性氧化鋁柱；

2)將步驟1)收集液的pH調至4-5，旋蒸濃縮，上大孔非極性樹脂，水洗除鹽，甲醇水溶液梯度洗脫；

3)將步驟2)合并收集液的pH調至6-7，上反相填料層析柱，甲醇水溶液洗脫；

4)將步驟3)收集液的pH調至4-5，旋蒸濃縮，凍干得棘白菌素B母核。

步驟1)結束后，棘白菌素B母核的收率為95％以上，液相純度為55-65％；步驟2)結束后，棘白菌素B母核的收率為70％以上，液相純度為85-90％；步驟3)結束后，棘白菌素B母核的收率為90％以上，液相純度為95％以上；上述方法的總收率在60％，棘白菌素B母核終純度在95％以上。

根據本發明的一個優選的實施方式，步驟1)中含棘白菌素B母核的轉化濾液過酸性氧化鋁柱，能夠有效吸附轉化液中色素和部分極性雜質而棘白菌素B母核不會被酸性氧化鋁吸附，減輕后續步驟的上柱壓力。優選地，所用酸性氧化鋁規格為：層析用FCP，100～200目。

根據本發明的一個優選的實施方式，步驟2)中將步驟1)收集液旋蒸濃縮后上大孔非極性樹脂柱后，先用2-3CV去離子水洗脫除鹽，后用5-10％甲醇水溶液洗脫去除極性較大雜質以及殘留色素，再用15-20％甲醇水溶液將棘白菌素B母核洗脫下來，此過程中分部收集，合并棘白菌素B母核液相純度85％以上的洗脫液。優選地，本步驟中使用的5-10％甲醇水洗脫液體積為2-3CV，15-20％甲醇水洗脫液體積為3-4CV。優選地，大孔非極性樹脂選自骨架材料為苯乙烯-二乙烯苯類樹脂。

根據本發明的一個優選的實施方式，步驟3)中上柱后用甲醇水溶液洗脫，分部收集，合并純度95％以上的洗脫液。旋蒸濃縮，冷凍干燥后制得白色至淡黃色粉末狀棘白菌素B母核。優選地，本步驟中所用的甲醇水洗脫液體積為3-4CV，甲醇濃度為15-25％。

根據本發明的一個優選的實施方式，以上各步驟中，上柱流速均可為1％CV/min，洗脫流速可為1-2％CV/min。