[發(fā)明專利]一種櫸樹無菌播種方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210145802.2
• 申請日: 2012-05-12
• 公開（公告）號: CN102657089A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉海龍;陳曉明;覃子海;張日清;汪靈丹;覃玉鳳;蔡玲;韋璐陽;王以紅;吳幼媚
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 45104
• 代理人: 黃永校

1.一種櫸樹無菌播種方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

1.1外植體的采集、消毒

收集櫸樹種子，將采回的種子用清水浸泡1天，再用洗潔精搓洗，然后用去離子水清洗1～3次，置于超凈工作臺上去種皮，將去除種皮的成熟合子胚用75％乙醇浸泡滅菌10?s，蒸餾水沖洗1～3次，再用0.1％HgCl₂以振蕩的方式進行滅菌處理?4～6?min，用無菌水沖洗3～5次，

1.2成熟合子胚愈傷誘導(dǎo)、愈傷增殖、芽分化培養(yǎng)、單芽生根培養(yǎng)

將消毒好的成熟合子胚接種到改良WPM+6-BA1.0～2.0?mg·L^-1+蔗糖30000?mg·L^-1+瓊脂4000?mg·L^-1的培養(yǎng)基上進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為25±2℃，1000～1500LX，每天光照10～14?h為宜，30?d后將誘導(dǎo)的大團愈傷組織分割成小團，轉(zhuǎn)接到改良WPM+6-BA0.5～1.0?mg·L^-1+蔗糖30000?mg·L^-1+瓊脂4000?mg·L^-1的增殖培養(yǎng)基上，以促進愈傷組織的增殖，愈傷組織增殖到一定數(shù)量后，轉(zhuǎn)入改良WPM+6-BA2.0mg·L^-1+NAA0～1.0?mg·L^-1+蔗糖30000?mg·L^-1+瓊脂4000?mg·L^-1的分化培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)愈傷組織分化出芽，

將誘導(dǎo)出的株高1.0cm以上的單芽剪下，接種到生根培養(yǎng)基1/2改良WPM+?IBA?0.1～1.0mg·L^-1+蔗糖20000?mg·L^-1+瓊脂5000?mg·L^-1中誘導(dǎo)生根，

其中，所述改良WPM培養(yǎng)基的組成為：

KNO₃???????????????????900mg·L^-1

NH₄NO₃?????????????????400?mg·L^-1

CaCl₂.2H₂O??????????????264?mg·L^-1

MgSO₄.7H₂O??????????????370?mg·L^-1

Ca(NO₃)₂.?4?H₂O???????????556?mg·L^-1

KH₂PO₃??????????????????270?mg·L^-1

MnSO₄.4?H₂O?????????????22.3?mg·L^-1

ZnSO₄.7?H₂O?????????????8.6?mg·L^-1

FeSO₄·7H₂O??????????????27.8mg·L^-1

Na₂-EDTA·2H₂O??????????37.3mg·L^-1

CuSO₄.5?H₂O?????????????0.025?mg·L^-1

H₃BO_3???????????????????6.2?mg·L^-1

Na₂MoO₄.2?H₂O???????????0.25?mg·L^-1

KI?????????????????????0.83?mg·L^-1

CoCl₂.6?H₂O?????????????0.025?mg·L^-1

維生素B1???????????????0.4?mg·L^-1

維生素B6???????????????0.5?mg·L^-1

煙酸????????????????????0.5?mg·L^-1

甘氨酸??????????????????2.0?mg·L^-1

肌醇????????????????????100?mg·L^-1。