[發(fā)明專利]一種耐高溫的華根霉脂肪酶突變體有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210145502.4 | 申請日： | 2010-08-13 |
| 公開（公告）號： | CN102653742A | 公開（公告）日： | 2012-09-05 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 喻曉蔚;徐巖;王睿 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N9/20 | 分類號： | C12N9/20;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84 |
| 代理公司： | 無錫市大為專利商標事務(wù)所 32104 | 代理人： | 時旭丹;劉品超 |
| 地址： | 214122 江蘇省無錫市濱*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 耐高溫 華根霉 脂肪酶 突變體 | ||
1.一種耐高溫的華根霉脂肪酶突變體，其特征在于由親本華根霉（Rhizopus??chinensis?）CCTCC?NO：M?201021脂肪酶進行定向進化，通過易錯PCR、DNA?Shuffling和定點突變，獲得脂肪酶突變體，親本華根霉氨基酸序列SEQ?ID?NO:?1中在氨基酸取代位置發(fā)生突變，采用“原始氨基酸-位置-替換的氨基酸”來表示脂肪酶突變體中突變的氨基酸，所述脂肪酶突變體為：
脂肪酶突變體?：突變體12-1；
氨基酸取代位置：Ala230Phe/Leu180His/Thr218Ser/Val261Gly/Lys161Arg；
華根霉脂肪酶氨基酸突變體的氨基酸序列為SEQ?ID?NO:?2；
用于表達所述的脂肪酶突變體的表達載體為：pPIC9K，pPIC3.5K，pPICZα，pPICZ；
用于所述的表達載體轉(zhuǎn)化的微生物宿主細胞為畢赤酵母。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂肪酶突變體，其特征在于與親本華根霉脂肪酶相比，所述脂肪酶突變體的熱穩(wěn)定性獲得了提高，以在65℃下的半衰期t50來表示熱穩(wěn)定性的提高，所述脂肪酶突變體的半衰期以及提高的倍數(shù)如下：?
脂肪酶突變體：突變體12-1；
氨基酸取代位置：?Ala230Phe/Leu180His/Thr218Ser/Val261Gly/?Lys161Arg；
65℃?t50(min)：?755；65℃?t50(min)?提高倍數(shù)：45.76；
親本華根霉脂肪酶在65℃下的半衰期t50為16.5?min。
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