[發(fā)明專利]一種寬葉羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201210143781.0 | 申請(qǐng)日： | 2012-05-10 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN102657085A | 公開(kāi)（公告）日： | 2012-09-12 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 周國(guó)英;徐文華;劉衛(wèi)根;賀麗華;趙曉輝 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所 |
| 主分類號(hào)： | A01H4/00 | 分類號(hào)： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002 | 代理人： | 李艷華 |
| 地址： | 810001 *** | 國(guó)省代碼： | 青海;63 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 羌活 組織培養(yǎng) 快速 繁殖 方法 | ||
1.一種寬葉羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，包括以下步驟：
⑴外植體的選擇和消毒處理：以寬葉羌活的根芽為外植體，經(jīng)流水沖洗15~30分鐘，用體積濃度為75%的酒精浸泡滅菌20~30秒，然后以無(wú)菌去離子水沖洗2~3次，再將沖洗后的外植體置于質(zhì)量濃度為0.1%~0.2%的升汞中，浸泡滅菌8~13分鐘，并用無(wú)菌去離子水沖洗3~6次，即得消毒后的外植體單芽；
⑵外植體接種：將所述消毒后的外植體單芽接種在誘導(dǎo)芽分化培養(yǎng)基上，其中每25ml所述誘導(dǎo)芽分化培養(yǎng)基中接種1棵所述消毒后的外植體單芽；在溫度為20℃±2℃、光源為日光燈、光強(qiáng)為30~60?umol?.?m-2.?s-1、光照時(shí)間為12?h?.d-1的條件下培養(yǎng)25~30天，使根芽基部形成2~3個(gè)叢生芽；
⑶繼代增殖培養(yǎng)：將所述2~3個(gè)叢生芽接種到繼代增殖培養(yǎng)基上，其中每25ml所述繼代增殖培養(yǎng)基中接種1棵所述叢生芽；在溫度為20℃±2℃、光源為日光燈、光強(qiáng)為30~60?umol?.?m-2.?s-1、光照時(shí)間為12?h?.d-1的條件下培養(yǎng)25~35天，形成寬葉羌活叢生苗；
⑷生根誘導(dǎo)：將所述寬葉羌活叢生苗分株后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，其中每25ml所述生根培養(yǎng)基中接種1棵所述寬葉羌活叢生苗；在溫度為20℃±2℃、光源為日光燈、光強(qiáng)為30~60?umol?.?m-2.?s-1、光照時(shí)間為12?h?.d-1的條件下培養(yǎng)20~30天后，小苗基部出現(xiàn)白色、粗壯短根，并長(zhǎng)出完整根系，即得完整再生小苗；
⑸育苗基質(zhì)消毒：將育苗基質(zhì)在115~121℃溫度下進(jìn)行高溫消毒，15~20min后即得消毒后的育苗基質(zhì)；所述育苗基質(zhì)是指腐殖質(zhì)與珍珠巖按2：1重量比混合而成的混合基質(zhì)；
⑹植株移栽：將所述完整再生小苗直接移栽到所述消毒后的育苗基質(zhì)中，煉苗后即長(zhǎng)成正常寬葉羌活植株；所述一棵完整再生小苗種植在所述消毒后的育苗基質(zhì)10cm2的范圍內(nèi)。
2.如權(quán)利要求1所述的一種寬葉羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，其特征在于：所述步驟⑴中的寬葉羌活的基源植物為傘形科多年生草本植物寬葉羌活。
3.如權(quán)利要求1所述的一種寬葉羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，其特征在于：所述步驟⑵中的誘導(dǎo)芽分化培養(yǎng)基是指在1000ml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有機(jī)成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0.1mg/ml的6-芐氨基腺嘌呤母液5~20ml，濃度為0.1mg/ml的萘乙酸母液2~10ml，后加雙蒸餾水至1000ml刻度處，攪勻后，加入1mM?NaOH溶液調(diào)整pH值至5.8，最后加入瓊脂粉6.0~8.0克，在100ml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121℃高溫消毒即得。
4.如權(quán)利要求1所述的一種寬葉羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，其特征在于：所述步驟⑶中的繼代增殖培養(yǎng)基是指在1000ml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有機(jī)成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0.1mg/ml的6-芐氨基腺嘌呤母液5~20ml，濃度為0.1mg/ml的萘乙酸母液2~10ml，后加雙蒸餾水至1000ml刻度處，攪勻后，加入1mM?NaOH溶液調(diào)整pH值至5.8，最后加入瓊脂粉6.0~8.0克，在100ml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121℃高溫消毒即得。
5.如權(quán)利要求1所述的一種寬葉羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，其特征在于：所述步驟⑷中的生根培養(yǎng)基是指在1000ml的燒杯中，依次加入大量元素母液50ml，微量元素母液10ml，有機(jī)成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0.1mg/ml的吲哚丁酸母液5~15ml，后加雙蒸餾水至1000ml刻度處，攪勻后，加入1mM?NaOH溶液調(diào)整pH值至5.8，最后加入瓊脂粉6.0~8.0克，在100ml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121℃高溫消毒即得。
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