[發明專利]斑點叉尾鮰腸套疊二聯滅活疫苗的制備方法

無效

• 申請號: 201210143659.3
• 申請日: 2012-05-10
• 公開（公告）號: CN102641498A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發明（設計）人: 劉小燕;李權生;王榮華;戴振炎;何艷林
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學;安化縣移民開發局
• 主分類號: A61K39/116
• 分類號: A61K39/116;A61K39/02;A61P31/04
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所 43008
• 代理人: 江巨鰲

1.斑點叉尾鮰腸套疊二聯滅活疫苗制備方法，其特征在于：

A、疫苗的抗原為嗜水氣單胞菌和嗜麥芽寡養單胞菌兩種病原細菌，將滅活完全的菌體按等比例混合制成斑點叉尾鮰腸套疊二聯滅活疫苗；

B、用二聯疫苗對斑點叉尾鮰魚體浸泡接種或注射接種免疫。

2.根據權利要求1所述的斑點叉尾鮰腸套疊二聯滅活疫苗制備方法，其特征在于：所述菌種包括從發病斑點叉尾鮰體內分離出來的嗜水氣單胞菌和嗜麥芽寡養單胞菌。

3.根據權利要求1所述的斑點叉尾鮰腸套疊二聯滅活疫苗制備方法，其特征在于：其制備方法按以下步驟進行：

（1）將嗜水氣單胞菌和嗜麥芽寡養單胞菌分別接種到TSA，30±0.5℃培養24小時；

（2）分別將步驟（1）培養好的菌體，接種到無菌TSB中，在震蕩搖床中進行液體培養，培養溫度為30±0.5℃，搖床速度280~300r/min，培養時間為24小時；

（3）將步驟（2）中培養好的菌體分別在常溫下3500r/min離心30鐘，棄上清液，用無菌的0.85%的生理鹽水稀釋菌體到10⁸或10⁹CFU/ml；

（4）取出步驟（3）中稀釋得到菌液，加入福爾馬林溶液滅活，使福爾馬林的最終濃度為0.3%（V/V），?32±0.5℃下滅活72小時；

（5）根據斑點叉尾鮰的發病規律及程度，將以上兩種滅活菌液以等比例混合制成斑點叉尾鮰腸套疊二聯滅活疫苗，置4℃冰箱內儲藏。

4.根據權利要求1所述的斑點叉尾鮰腸套疊二聯滅活疫苗制備方法，其特征在于：按以下步驟進行：

（1）在具有典型出血性腸套疊斑點叉尾鮰病魚體內分離出嗜水氣單胞菌和嗜麥芽寡養單胞菌，將兩菌分別接種到無菌TSA上，30±0.5℃培養24小時；

（2）分別將步驟（1）培養好的菌體，接種到無菌TSB中，在震蕩搖床中進行液體培養，培養溫度為30±0.5℃，搖床速度280～300r/min，培養時間為24小時；

（3）將步驟（2）中培養好的菌體分別在常溫下3500r/min離心30鐘，棄上清液，用經無菌的0.85%的生理鹽水稀釋菌體到10⁸或10⁹CFU/ml；

（4）取出步驟（3）中稀釋得到菌液，加入福爾馬林溶液滅活，使福爾馬林的最終濃度為0.3%（V/V），?32±0.5℃下滅活72小時；

（5）根據斑點叉尾鮰的發病規律及程度，將以上兩種滅活菌液以等比例混合制成斑點叉尾鮰腸套疊二聯滅活疫苗，置4℃冰箱內儲藏。

5.根據權利要求1所述的斑點叉尾鮰腸套疊二聯滅活疫苗，其特征在于：所述的浸泡接種或注射接種為：

A、浸泡接種，取二聯疫苗于容器中，加入蜂膠佐劑，再加入無菌水，使疫苗稀釋200倍，佐劑的最終濃度為0.1mg/ml，攪勻后將魚投入容器內浸泡接種疫苗15～30分鐘；

B、注射接種，將二聯疫苗用0.85%的無菌生理鹽水稀釋5倍?，加入蜂膠佐劑，使其最終濃度為0.01mg/ml，溶解搖勻后，用注射器向魚體腹腔注射，用量為8～10厘米的魚種0.1～0.3ml/尾。

6.斑點叉尾鮰腸套疊的免疫方法，其特征在于：將滅活完全的嗜水氣單胞菌和嗜麥芽寡養單胞菌兩種病原細菌菌體按等比例混合制成斑點叉尾鮰腸套疊二聯滅活疫苗的應用。