[發明專利]利用大腸埃希氏菌BA305發酵生產丁二酸的方法

無效

• 申請號: 201210142752.2
• 申請日: 2012-05-10
• 公開（公告）號: CN102649970A
• 公開（公告）日: 2012-08-29
• 發明（設計）人: 姜岷;梁麗亞;劉嶸明;馬江鋒;陳可泉;韋萍
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C12P7/46
• 分類號: C12P7/46;C12R1/19
• 代理公司: 江蘇致邦律師事務所 32230
• 代理人: 樊文紅

1.一種利用大腸埃希氏菌（Escherichia?coli）BA305發酵生產丁二酸的方法，其特征在于循環利用重組大腸桿菌細胞生產丁二酸：

（1）利用重組大腸桿菌采用兩階段發酵生產丁二酸

用LB培養基活化菌體，將大腸埃希氏菌?BA305接種入發酵罐，發酵培養基為LB培養基并添加碳源，通入空氣或純氧進行有氧培養，當有氧培養菌體OD₆₀₀至0.4～0.6用0.3?mM的IPTG誘導，繼續有氧培養15h至OD₆₀₀=19，停止通入空氣或純氧，通入CO₂并添加碳源進行厭氧發酵產酸，同時添加中和劑調控pH值6.4-6.8；

（2）當步驟（1）的培養基中測定無殘糖時，兩階段發酵結束；通過無菌離心或無菌膜過濾獲得菌體細胞，并將菌體細胞繼續加入新鮮LB培養基及碳源，重復厭氧發酵丁二酸的步驟。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的中和劑為堿式碳酸鎂、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的碳源為葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、果糖或者其組合。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的碳源為玉米芯水解液、稻草秸稈水解液、糖蜜水解液或者甘蔗渣水解液。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的步驟（2）中測定無殘糖的標準為：菌體細胞碳源的消耗速率下降至0.6?g/(L·h)。