[發明專利]一株微生物菌株及其應用

有效

• 申請號: 201210142423.8
• 申請日: 2012-05-10
• 公開（公告）號: CN102643772A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發明（設計）人: 龍章德;黃泰松;韋建玉;白森;鄒克興;胡亞杰;蔡聯合;金亞波;張紀利
• 申請（專利權）人: 廣西中煙工業有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A24B15/20;C12R1/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.微生物菌株，其特征在于：它為煙草節桿菌Arthrobacter?nicotianae?GYC103，保藏號為CCTCC?NO：M2010312。

2.如權利要求1所述的微生物菌株，其特征在于：所述菌株為革蘭氏陽性，厭氧陰性，接觸酶陽性，氧化酶陰性，明膠液化陰性，硝酸鹽還原陽性，檸檬酸鹽陽性，脲酶陰性，丙二酸鹽陰性，V-P陰性，耐鹽性陽性；葡萄糖陰性，甘露醇陰性，乳糖陰性，蔗糖陰性，麥芽糖陰性，木糖陰性，核糖陰性；在培養基上生長時可見表面光滑不透明、邊緣整齊的黃色菌落，最適生長溫度為25-30℃。

3.如權利要求1所述的微生物菌株，其特征在于：所述菌株通過如下途徑獲得：

首先從土壤或者煙葉中分離出降解煙草煙堿的微生物菌株；

其次將獲得的微生物菌株用牛奶選擇培養基進行篩選，獲得可以產生蛋白酶的菌株；

然后將得到的菌株用淀粉選擇培養基篩選能夠產生淀粉酶的菌株，獲得可以同時降解蛋白質和淀粉的煙堿降解菌，即煙草節桿菌Arthrobacter?nicotianae?GYC103。

4.如權利要求1至3任一所述的微生物菌株，其特征在于：所述菌株的培養步驟為：

A、斜面培養：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g，瓊脂15g，蒸餾水1000ml，pH7.0，將冷凍保存的甘油懸液接種到斜面培養基上，30℃恒溫培養2天；

B、搖瓶培養：煙堿2g，蛋白胨5g，酵母膏5g，氯化鈉5g，K₂HPO₄·3H₂O13.3g，KH₂PO₄4g，MgSO₄·7H₂O0.2g，0.5ml微量元素，加蒸餾水1000ml，調pH值為7.0，高壓蒸汽滅菌；搖瓶裝液量為10～30v/v％，接種量為2～10v/v％，培養溫度為20～40℃，搖床轉速為100～200rpm，搖瓶培養1～3天，煙堿降解率達到85～100％，蛋白酶活力達到18～60U/ml，淀粉酶活達到10～40U/ml。

5.如權利要求4所述的微生物菌株，其特征在于：所述微量元素為：CaCl₂0.04g，CuSO₄0.07g，MnSO₄·H₂O0.008g，FeSO₄·7H₂O0.004g，Na₂MoO₄·2H₂O0.1g，加0.1mol·L^-1的HCl溶解定容100ml。

6.如權利要求1至3任一所述的微生物菌株，其特征在于：它可以降解煙草煙堿，在生長過程中可以產生淀粉酶和蛋白酶。

7.一株微生物菌株的應用，其特征在于，所說煙草節桿菌Arthrobacter?nicotianaeGYC103用于降解煙草中的煙堿、淀粉和蛋白質；所說的用于降解煙草中的煙堿、淀粉和蛋白質，通過如下步驟獲得：

A、將權利要求1所述的煙草節桿菌Arthrobacter?nicotianae?GYC103進行發酵培養，獲得發酵液及菌體；

B、將步驟a所得的發酵液或菌體用水、生理鹽水或者緩沖液進行稀釋，稀釋后菌液濃度達到10⁶～10¹²個菌/ml，將菌液按照煙葉重量的1～5％，加入到含水量為10～50％的煙草中進行發酵，發酵溫度為10～50℃，發酵時間大于4小時。

8.如權利要求6所述的微生物菌株的應用，其特征在于，其中步驟A中所說的發酵液為巴比妥緩沖液、鄰苯二甲酸鹽緩沖液、氨-氯化銨緩沖液、硼砂-氯化鈣緩沖液、醋酸-醋酸鈉緩沖液、醋酸-醋酸銨緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液或磷酸鹽緩沖液中的任意一種。