[發(fā)明專利]高產(chǎn)香紫蘇醇菌株的構(gòu)建方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210142311.2
• 申請日: 2012-05-09
• 公開（公告）號: CN103387944A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙宗保;楊薇
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/54;C12N15/53;C12P7/02;C12R1/865
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.高產(chǎn)香紫蘇醇菌株的構(gòu)建方法，其特征在于：增加宿主香紫蘇醇合成的前體物質(zhì)——雙牻牛基焦磷酸(GGPP)，進(jìn)而使更多的GGPP流向香紫蘇醇的合成過程；

所述宿主為釀酒酵母。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于：

所述釀酒酵母工程菌株構(gòu)建過程如下：

1)將香紫蘇醇合成關(guān)鍵酶基因在釀酒酵母中表達(dá)；進(jìn)而使更多的GGPP流向香紫蘇醇的合成過程；

關(guān)鍵酶基因?yàn)椋航沽姿豳嚢佼?dāng)烯二醇酯合酶基因(LPPs)和香紫蘇醇合酶基因(Tps)；

2)將GGPP合成的相關(guān)酶基因在釀酒酵母中過表達(dá)；進(jìn)而增加宿主香紫蘇醇合成的前體物質(zhì)；

相關(guān)酶基因?yàn)椋毫u甲基輔酶A還原酶基因(HMG1)、法尼基焦磷酸合酶基因(ERG20)和雙牻牛基焦磷酸合酶基因(BTS1)中的一個或二個以上酶基因的組合。

3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其特征在于：

所述的基因LPPs和Tps，按照釀酒酵母密碼子偏好性進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)化后序列如序列1和2所示，優(yōu)化后序列于釀酒酵母中單獨(dú)表達(dá)或共表達(dá)或融合表達(dá)，表達(dá)全長或N端截短的蛋白，LPPs蛋白N端截短長度為50-70aa，Tps蛋白N端截短長度為40-60aa。

4.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其特征在于：

所述的基因HMG1于釀酒酵母中過表達(dá)全長或N端截短的蛋白，N端截短長度為520-540aa；所述的基因ERG20和BTS1于釀酒酵母中單獨(dú)過表達(dá)或共過表達(dá)或融合過表達(dá)。

5.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其特征在于：

關(guān)鍵酶基因在釀酒酵母中表達(dá)，關(guān)鍵酶基因?yàn)椋航沽姿豳嚢佼?dāng)烯二醇酯合酶基因(LPPs)和香紫蘇醇合酶基因(Tps)，基因的拷貝數(shù)分別由0增加到10-20個；

相關(guān)酶基因在釀酒酵母中過表達(dá)，基因的拷貝數(shù)由1個增加到10-20個。

6.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其特征在于：將獲得的基因工程菌株在YPD培養(yǎng)液中，30℃，200rpm培養(yǎng)48-72h，加入與培養(yǎng)液等體積的正己烷，震蕩混勻0.5-1h，離心分層，取上層有機(jī)相，旋蒸濃縮后即為含有香紫蘇醇的粗品。

7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其特征在于：所述生產(chǎn)的香紫蘇醇，可作為香料的有效成分或龍涎香等香料的前體化合物，用于香水、化妝品、調(diào)味原料等領(lǐng)域；可作為抗菌、抗炎癥、抗腫瘤等醫(yī)藥品或醫(yī)藥品前體化合物，用于醫(yī)藥衛(wèi)生等領(lǐng)域。