[發明專利]一種生產重組粉塵螨變應原Der f1和Der f2融合蛋白的方法無效
| 申請號： | 201210139240.0 | 申請日： | 2012-05-08 |
| 公開（公告）號： | CN102676568A | 公開（公告）日： | 2012-09-19 |
| 發明（設計）人： | 崔玉寶;蔡紅星;楊慶貴;王運剛 | 申請（專利權）人： | 崔玉寶;蔡紅星;楊慶貴;王運剛 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 224056 江蘇省鹽*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 生產 重組 粉塵 螨變應原 der f1 f2 融合 蛋白 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種生產重組粉塵螨變應原Der?f1和Der?f2融合蛋白的方法，其特征在于它通過提取粉塵螨總RNA，根據GenBank公布的粉塵螨變應原第1組份(Der?f1)和粉塵螨變應原第2組份(Der?f2)核酸序列設計引物，用PCR擴增獲得其編碼基因，依次克隆至pMD19-T載體、亞克隆至表達載體pET-28a(+)并轉化至大腸桿菌并用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導表達，以PMD19-T-Der?f1、PMD19-T-Der?f2為模板，PCR擴增后切膠、回收產物Der?f1和Der?f2，PCR搭鏈構建嵌合基因片段，切膠回收產物并命名為Der?fm，克隆至pMD19-T載體、亞克隆至表達載體pET-28a(+)并轉化至大腸桿菌并用IPTG誘導表達。所有表達產物經瓊脂糖凝膠FF親和柱層析純化后，用SDS-PAGE和Western-blotting驗證產物。
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