[發(fā)明專(zhuān)利]基于碳納米材料的免疫分析方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210138986.X
• 申請(qǐng)日: 2012-05-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102662049A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-09-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林金明;林珍;周云;張煒奮
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 清華大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/53
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/53
• 代理公司: 北京聿宏知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11372
• 代理人: 吳大建;歐穎

1.一種基于碳納米材料的免疫分析方法，其中，所述碳納米材料又稱(chēng)為碳點(diǎn)，所述方法包括如下步驟：

步驟A，制備碳點(diǎn)并在碳點(diǎn)的表面標(biāo)記免疫試劑抗原或抗體，使之成為免疫試劑標(biāo)記碳點(diǎn)；

步驟B，將免疫試劑標(biāo)記碳點(diǎn)、待測(cè)樣本、以及免疫試劑抗原或抗體包被的固相物質(zhì)混合完成免疫反應(yīng)形成免疫復(fù)合物；將所述免疫復(fù)合物與游離免疫試劑進(jìn)行分離；

步驟C，對(duì)所述免疫復(fù)合物加入氧化劑進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，和/或?qū)ζ渲苯舆M(jìn)行熒光檢測(cè)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述碳點(diǎn)為以PEG1500、甘油和絲氨酸混合制備得到，碳點(diǎn)制備方法為微波合成法或水熱合成法。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述碳點(diǎn)粒徑為3~4nm，其表面帶有羧基和羥基基團(tuán)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟A中碳點(diǎn)與免疫試劑抗原或抗體的結(jié)合為化學(xué)鍵直接結(jié)合或生物方法間接鍵合。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟B中固相物質(zhì)為磁性顆粒、聚合物微球、玻璃微珠和96孔微板中的一種或多種。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟B中待測(cè)樣本為小分子目標(biāo)物或者大分子目標(biāo)物。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，根據(jù)待測(cè)樣本的特點(diǎn)，選擇所述步驟B中免疫反應(yīng)的模式為夾心反應(yīng)模式或競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)模式。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟B中夾心反應(yīng)模式免疫反應(yīng)的完成采取如下兩種方式之一：即待測(cè)樣本、免疫試劑包被的固相物質(zhì)混合發(fā)生免疫反應(yīng)形成一種免疫復(fù)合物，再與免疫試劑標(biāo)記碳點(diǎn)混合形成免疫復(fù)合物；或者免疫試劑標(biāo)記碳點(diǎn)、待測(cè)樣本、以及免疫試劑包被的固相物質(zhì)三者混合發(fā)生免疫反應(yīng)形成免疫復(fù)合物。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟C中所述化學(xué)發(fā)光檢測(cè)為氧化劑與碳點(diǎn)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光后，由光電倍增管對(duì)產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度進(jìn)行采集記錄；所述熒光檢測(cè)為使用熒光分光光度計(jì)對(duì)碳點(diǎn)的熒光強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟A中用磷酸鹽緩沖液洗滌和/或保存所述免疫試劑標(biāo)記碳點(diǎn)，在步驟B中用磷酸鹽緩沖液洗滌所述免疫復(fù)合物；所述磷酸鹽緩沖液由磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氯化鈉和氯化鉀溶液組成；步驟C中所述氧化劑為高錳酸鉀、硫酸鈰、高碘酸鉀和鐵氰化鉀中的一種或多種。