[發明專利]一種真菌漆酶誘導活性化合物及其發酵制備方法與應用

有效

• 申請號: 201210138447.6
• 申請日: 2012-05-07
• 公開（公告）號: CN102786411A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發明（設計）人: 肖亞中;方澤民;劉娟娟;洪宇植;房偉
• 申請（專利權）人: 安徽大學
• 主分類號: C07C59/245
• 分類號: C07C59/245;C12N9/02;C12R1/645
• 代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責任公司 34101
• 代理人: 何梅生;王偉

1.一種對真菌漆酶具有高誘導活性的化合物，其特征在于，該化合物有如下分子式：

。

2.如權利要求1所述的活性化合物在誘導真菌漆酶合成方面的應用。

3.如權利要求1所述的活性化合物的發酵制備方法，其特征在于：使用的發酵菌株為Gongronella?sp.，經發酵培養獲得發酵液，所述發酵液經分離純化后獲得權利要求1所述的純活性化合物。

4.根據權利要求3所述的活性化合物的發酵制備方法，其特征在于：所述發酵培養是指將Gongronella?sp.接種在經滅菌的pH4.0~7.0的發酵培養基中，于溫度25~31^oC、搖床轉速100~150rpm條件下培養3~7天后通過紗布過濾收集發酵液備用；所述的發酵培養基為每升水中含10~20g蔗糖、1~2g?DL-天冬酰胺、0.7~1.5g?KH₂PO₄、0.2~0.6g?MgSO₄·7H₂O、0.02~0.15g?Na₂PO₄·7H₂O、0.01~0.05g?CaCl₂、0.01~0.05g?FeSO₄·7H₂O、0.01~0.04g?腺嘌呤、20~60μg?VB₁。

5.根據權利要求4所述的活性化合物的發酵制備方法，其特征在于，所述的發酵培養基為每升水中含15g蔗糖、1.5g?DL-天冬酰胺、1g?KH₂PO₄、0.5g?MgSO₄·7H₂O、0.1g?Na₂PO₄·7H₂O、0.01g?CaCl₂、0.01g?FeSO₄·7H₂O、0.0275g腺嘌呤、50μg?VB₁。

6.根據權利要求3所述的活性化合物的發酵制備方法，其特征在于，所述分離純化依次包括以下步驟：

(1)?制備的發酵液通過萃取劑1:1（v/v）萃取，萃取液在100~2000Pa，30~55^oC的條件下減壓蒸餾，去除萃取劑，得到活性化合物粗制品；所述萃取劑為乙酸乙酯、二氯甲烷、石油醚中的任意一種；

(2)?將粗制品通過甲醇溶解，按照粗制品與層析樹脂A質量比1:?10~20上樣，使用體積濃度20%、40%、60%、80%、100%甲醇水溶液梯度洗脫，每個濃度洗脫3~5柱體積，收集合并活性化合物組分并在100~2000Pa，30~55^oC的條件下減壓蒸餾濃縮收集的層析組分，得濃縮產物一；

(3)?步驟(2)中獲得的濃縮產物一通過甲醇溶解，按照粗制品與層析樹脂B質量比1:?10~20上樣，使用體積濃度20%、40%、60%、80%、100%甲醇水溶液梯度洗脫，每個濃度?洗脫3~5柱體積，收集合并含活性化合物組分并在100~2000Pa，30~55?^oC的條件下減壓蒸餾，得濃縮產物二；

(4)?步驟(3)中獲得的濃縮產物二通過甲醇溶解，按照粗制品與層析樹脂C質量比1:10~20上樣，使用體積20%、40%、60%、80%、100%甲醇水溶液梯度洗脫，每個濃度洗脫3~5柱體積，收集合并含活性化合物組分并在100~2000Pa，30~55^oC的條件下減壓蒸餾獲得純物質。

7.根據權利要求6所述的活性化合物的發酵制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中所述的層析樹脂A為市售D101、LX-60非極性大孔樹脂。

8.根據權利要求6所述的活性化合物的發酵制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述的層析樹脂B為市售MCI?GEL?CHP?20P?MCI系列精細層析樹脂。

9.根據權利要求6所述的活性化合物的發酵制備方法，其特征在于，步驟(4)中所述的層析樹脂C為市售十八烷基硅烷鍵合硅膠?(ODS)等非極性層析樹脂。?