[發明專利]百日咳博德特氏菌和副百日咳博德特氏菌的特異性檢測用引物探針組合和試劑盒有效
| 申請號： | 201210137098.6 | 申請日： | 2012-05-07 |
| 公開（公告）號： | CN102634596A | 公開（公告）日： | 2012-08-15 |
| 發明（設計）人： | 文鋒 | 申請（專利權）人： | 鎮江和創生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 212132 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 百日咳 博德特氏菌 特異性 檢測 引物 探針 組合 試劑盒 | ||
1.一種用于特異性檢測樣品中百日咳博德特氏菌和副百日咳博德特氏菌核酸的引物組合，這套序列組合特征在于包括下列引物：
P1：5`-atcagacccgcggcttcatc-3`，
P2：5`-gctgcgctgctacttcagctt-3`，5
P3：5`-cgtattcttgacggcaggtatttgac-3`，
P4：5`-atagccctgccagcctccca-3`。
2.一種用于特異性檢測樣品中百日咳博德特氏菌和副百日咳博德特氏菌核酸的引物和寡核苷酸探針組合，其中引物為權利要求1所述的引物，寡核苷酸探針為：
Probe1：5`-X1-cagacgagatccagcgctgggcc-Y1-3`，
Probe2：5`-X2-caggagtgcagggagatgctggatc-Y2-3`。
X1和X2為熒光報告基團，Y1和Y2為熒光淬滅基團。
3.如權利要求2所述，這套序列組合特征還在于，其中Probe1熒光報告基團X1為Fam，熒光淬滅基團Y1為Eclipse，Probe2熒光報告基團X2為Hex，熒光淬滅基團Y2為Eclipse。
4.如權利要求2所述，這套序列組合特征還在于，可用于雙重實時熒光聚合酶鏈反應檢測，即一個反應體系可同時檢測和鑒別百日咳博德特氏菌和副百日咳博德特氏菌核酸。
5.一種用于特異性檢測樣品中百日咳博德特氏菌和副百日咳博德特氏菌核酸的試劑盒，其中包括PCR反應液、酶混合液、陰性質控品和陽性質控品。其特征在于PCR反應液中用于核酸擴增反應的引物序列如下：
P1：5`-atcagacccgcggcttcatc-3`，
P2：5`-gctgcgctgctacttcagctt-3`，
P3：5`-cgtattcttgacggcaggtatttgac-3`，
P4：5`-atagccctgccagcctccca-3`。
6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于PCR反應液中用于熒光信號監測的寡核苷酸探針的序列如下：
Probe1：5`-X1-cagacgagatccagcgctgggcc-Y1-3`，
Probe2：5`-X2-caggagtgcagggagatgctggatc-Y2-3`。
X1和X2為熒光報告基團，Y1和Y2為熒光淬滅基團。
7.如權利要求5所述的的試劑盒，其特征還在于PCR反應液中用于熒光信號監測的寡核苷酸探針：其中Probe1熒光報告基團X1為Fam，熒光淬滅基團Y1為Eclipse，Probe2熒光報告基團X2為Hex，熒光淬滅基團Y2為Eclipse。
8.如權利要求5所述的的試劑盒，其特征還在于PCR反應體系為20μl，包括2×PCR緩沖液10μl、10mmol/L?dNTP?1.0μl、25μmol/L引物各0.5μl、10μmol/L探針各0.2μl、熱啟動Taq酶混合液0.4μl、樣品DNA?2μl，加滅菌水至終體系20μl。
9.如權利要求5所述的的試劑盒，其特征還在于PCR反應循環參數為：
95℃，2min；進入循環階段：95℃變性10s，60℃退火延伸1min，共反應40個循環。
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