[發(fā)明專利]蒙古口蘑液體發(fā)酵及發(fā)酵產物的抗腫瘤活性

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210137068.5
• 申請日: 2012-05-04
• 公開（公告）號: CN102784175A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發(fā)明（設計）人: 包海鷹;蘇日古格
• 申請（專利權）人: 包海鷹
• 主分類號: A61K36/07
• 分類號: A61K36/07;A01G1/04;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域：

本發(fā)明公開了蒙古口蘑液體發(fā)酵條件的優(yōu)化以及發(fā)酵產物的抗腫瘤活性，并提供發(fā)酵條件的優(yōu)化方法，研究表明該發(fā)酵產物對肝癌H₂₂荷瘤具有較好的抑制作用，且對免疫系統沒有明顯的負面影響。此方法提高了液體發(fā)酵的產量，從而解決了使用蒙古口蘑的菌絲體代替野生蒙古口蘑子實體的問題。并為預防及治療腫瘤藥開發(fā)提供依據。?

背景技術：

癌癥（惡性腫瘤）是當前危害人類健康的重要疾病之一。據世界衛(wèi)生組織統計，癌癥已成為繼心血管疾病之后的人類第二大疾病。全球每年約有600萬人死于各種癌癥，其中我國約130萬人死于癌癥，隨著人口數量的增加和人口老齡化的加快，腫瘤發(fā)病率和死亡率也呈上升趨勢。大型真菌入藥在我國已經有兩千多年的歷史，世界上第一部藥物專著《神農本草經》即記載了桑黃、靈芝、茯苓、雷丸、豬苓等藥用真菌的藥效，其具有抗腫瘤、抗病毒、降膽固醇、降血壓、抗血小板凝集等活性，尤其抗腫瘤活性引人注目。?

蒙古口蘑隸屬于擔子菌綱（Basidiomycetes），傘菌目（Agaricales），口蘑科（Tricholomataceae），口蘑屬（Tricholoma）真菌。每年夏末秋初雨后在草原上產生并且形成蘑菇圈，是我國珍稀的食用藥用菌，子實體入藥，性平、味甘，民間用于治療胃氣痛、潰瘍、脘腹脹滿、食欲不振、神經衰弱?、消化不良、腹瀉、降低血壓，治療軟骨病、降低膽固醇的含量、預防肝炎，還具一定的防癌抗癌作用。?

發(fā)明內容：

本發(fā)明公開了蒙古口蘑液體發(fā)酵條件的優(yōu)化方法以及配方，具體如下：?

表1?第一次改良后的培養(yǎng)基列表?

表2??3號培養(yǎng)基改良后的培養(yǎng)基列表?

表3??4號培養(yǎng)基改良后培養(yǎng)基列表?

說明書附圖的圖1是蒙古口蘑液體發(fā)酵條件的第一次改良結果圖，從說明書附圖的圖1結果中可以看出優(yōu)化的三種培養(yǎng)基中3號的生物量明顯增加（表5-6）。1號培養(yǎng)基中的菌絲體呈現不規(guī)則形狀，2號培養(yǎng)基中的菌絲體形成小顆粒狀，而3號培養(yǎng)基中的菌絲體呈現圓球形。從圖1的結果選3號為基礎培養(yǎng)基，并進行土壤的梯度與生物量量效關系實驗。結果表明土壤500g的煎煮液配成的培養(yǎng)基的生物量可以達到5.37g/L，隨著土壤的煎煮液的濃度的增加生物量增加。?

表4?改良后的菌球的生長情況?

注：1.羊糞培養(yǎng)基2.羊草培養(yǎng)基3.土壤培養(yǎng)基?

說明書附圖的圖2是土壤梯度液體發(fā)酵中的生長情況圖，從圖2測得生物量的大小順序為9＞8＞7＞6＞5＞4。?

表5??3號培養(yǎng)基改良后的菌球生長情況?

說明書附圖的圖3是牛奶含量梯度培養(yǎng)基中的生長情況圖，從圖3?的牛奶的含量梯度與生物量的量效關系實驗結果表明，生物量的大小順序為13＞14＞11＞12＞10。?

表6??4號培養(yǎng)基改良后的菌球生長情況?

本發(fā)明公開了液體發(fā)酵產物菌球的小鼠抗腫瘤活性的研究，方法與結果如下：?

無菌條件下，取接種7d的種鼠腹水肝癌H₂₂細胞，用生理鹽水制成細胞個數為1×10⁶-5×10⁶/mL的細胞懸液，以每鼠0.1mL接種于小鼠左后肢腋窩皮下，隨機分組，每組10只。次日開始給藥，陽性藥組隔天腹腔注射環(huán)磷酰胺（20mg/kg），?體積為0.2mL/10g，受試藥組（500mg/kg，100mg/kg，）和對照組（生理鹽水）灌胃給藥，體積為0.2mL/10g，連續(xù)10d，第11天處死小鼠，摘取瘤塊、胸腺和脾臟，分別稱重。腫瘤抑制率=（對照組平均瘤重－給藥組平均瘤重）/對照組平均瘤重×100%。胸腺指數為每g體重中胸腺的mg數，脾指數為每g體重中脾臟的mg數，各數值均以平均值±標準差（?）來表示。通過軟件spss?18.0統計分析數據，p<0.05說明在統計學上差異顯著，p<0.01說明在統計學上差異極顯著。?