[發(fā)明專利]成熟油菜次生休眠種子RNA的提取方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210135479.0
• 申請日: 2012-05-04
• 公開（公告）號: CN102634511A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙祥祥;劉福霞;唐瑭;趙祥強(qiáng);盧長明;王興龍
• 申請（專利權(quán)）人: 淮陰師范學(xué)院
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務(wù)所 32237
• 代理人: 龔擁軍

1.成熟油菜次生休眠種子RNA的提取方法，選用RNA?plant?plus?reagent植物總RNA提取試劑，通過β-巰基乙醇抑制RNA酶活性、防止酚類物質(zhì)氧化，應(yīng)用醋酸鈉去除多糖類物質(zhì)對RNA的影響，并減少抽提次數(shù)，縮短提取時間，?其步驟包括：

（1）取0.1g成熟的油菜次生休眠種子放入加有液氮的研缽中，迅速磨成粉末；

（2）將步驟（1）制得的粉末加入含有RNA?plant?plus植物總RNA提取試劑的離心管，渦旋振蕩至徹底混勻；室溫靜置，再加入預(yù)冷的苯酚-氯仿-異戊醇（25：24：1）混勻，4℃13000rpm離心5min，取上清液；

（3）將步驟（2）制得的上清液轉(zhuǎn)移至一新離心管中，加入醋酸鈉和無水乙醇，倒轉(zhuǎn)2-3次混勻后冰上靜置，4℃?13000rpm離心4min，棄上清，乙醇洗沉淀，室溫下干燥，用RNase-free?ddH₂O溶解沉淀即得。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述步驟（2）中每百毫克油菜種子粉末中加入RNA?plant?plus?reagent提取試劑（TIANGEN公司生產(chǎn)，使用前按照體積比1：4加入β-巰基乙醇與RNAplant?plus?reagent混合）700-1000μl。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述的步驟（2）中苯酚-氯仿-異戊醇（25：24：1）用量為400-600μl。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述的步驟（2）和步驟（3）中的靜置時間為3-5?min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述的步驟（3）中醋酸鈉濃度為3mol/L、pH值為5.2，用量為60-80μl。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述的步驟（3）中無水乙醇用量為1300-1500μl。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述的步驟（3）中的乙醇洗沉淀為75%乙醇洗滌，洗滌次數(shù)為1-2次。