[發明專利]從血液或血液級分中分離的凝血酶

在審

• 申請號: 201210135394.2
• 申請日: 2012-05-02
• 公開（公告）號: CN102766616A
• 公開（公告）日: 2012-11-07
• 發明（設計）人: 希拉里·奧弗霍爾澤;珍妮弗·E·沃德爾-馬伊
• 申請（專利權）人: 拜歐米特生物制劑有限責任公司
• 主分類號: C12N9/74
• 分類號: C12N9/74;A61K38/48;A61P7/04
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 顧晉偉;盧蓓

技術領域

本發明涉及從血液或血液級分中分離凝血酶的方法，包括用這種方法產生的組合物和施用這些組合物的方法。

背景技術

全血，如人的全血，含有多種蛋白質、細胞以及其他成分。例如，全血可分離為血液級分如富血小板血漿和貧血小板血漿。全血和血漿級分包含各種凝血因子，如凝血酶，這些凝血因子可形成凝塊來愈合組織或皮膚的損傷或別的破口。

凝血酶是能夠活化多種凝血因子并且可活化血小板的多功能絲氨酸蛋白酶。凝血酶可通過活化的因子X(Xa)對凝血酶原上兩個位點的酶切由凝血酶原產生。因子Xa的活性可通過與活化的因子V(Va)結合而增強，其稱作凝血酶原復合物。一旦形成，凝血酶介導的纖維蛋白原通過蛋白水解而消化為纖維蛋白單體，啟動了可導致凝塊形成的反應級聯，這通常是傷口愈合的第一步。凝血酶還可作為傷口愈合所涉及細胞的化學吸引劑(chemo-attractant)發揮功能，所得纖維蛋白網絡具有很多的功能，其包括：作為產生膠原蛋白的成纖維細胞的支架、增加吞噬作用、促進血管發生、以及結合生長因子，其可進一步支持愈合過程提供。血小板也可從非結合模式活化為結合模式。作為促凝血物質，凝血酶在制止出血(即生理止血)中發揮重要作用。

凝塊形成的速率可依賴于凝血酶和纖維蛋白原的濃度。因為其在凝塊形成中的重要作用，凝血酶可用作組織封閉劑(tissue?sealant)或粘合劑，也可與纖維蛋白原聯合使用。包括凝血酶的傷口封閉劑的應用有很多，其包括在下列中的使用：皮膚移植、神經外科、心臟外科、胸外科、血管外科、腫瘤外科、整形外科、眼外科、矯形外科、創傷外科、頭頸外科、婦科及泌尿外科、胃腸外科、口腔外科、藥物遞送、組織工程、以及牙體窩洞(dental?cavity)止血等。

發明內容

本發明包括涉及從血液和/或血液級分中分離凝血酶的方法、裝置和組合物，例如，其中所述分離的凝血酶可用作自體凝血因子。

制備包含凝血酶之溶液的方法包括從液體中沉淀纖維蛋白原，所述液體包含全血或血液級分(如貧血小板血漿)。從所述液體中除去沉淀的纖維蛋白原，以形成沉淀后液體。除去沉淀的纖維蛋白原的方法包括過濾所述液體或離心所述液體以使沉淀的纖維蛋白沉積下來。然后，將所述沉淀后液體與鈣和玻璃珠一起孵育以形成凝塊，將包含凝血酶的溶液與凝塊分離。

提供包含凝血酶的溶液和組合物，其包含按照本方法制備的凝血酶。向對象之部位施用組織封閉劑的方法中可包括這些溶液和組合物。例如，包含凝血酶的溶液根據本文所述方法制備。然后，將凝血酶施用到對象的所述部位。在某些情況下，使用包含獲得自對象的全血或血液級分的液體來制備凝血酶，從而提供對所述對象來說為自體的凝血酶。在施用組織封閉劑中凝血酶的施用還可包括向對象的部位施用纖維素蛋白原和鈣。

附圖說明

圖1是根據本發明制備包含凝血酶的溶液之方法的圖示。

圖2是根據本發明制備包含凝血酶的溶液之另一個方法的圖示。

圖3是根據本發明制備包含凝血酶的溶液之另一個方法的圖示。

圖4是根據本發明的方法分離血液級分的示例性裝置的局部橫截面圖。

圖5A和圖5B分別是根據本發明的方法制備包含凝血酶的溶液之裝置的等軸測視圖(isometric?view)和局部橫截面圖。

應當指出這里給出的附圖意在示例本發明中材料和方法的一般特征，目的是描述某些實施方案。這些附圖可能沒有精確反映任何給定實施方案的特征，并且也不一定意在限定或限制本發明范圍內的特定實施方案。

具體實施方式

以下對技術的描述僅僅是根據一項或多項發明的主題、制造和用途之本質的示例，而不是意在限制本申請或者可以要求本申請優先權而申請的其他申請或者這些申請所授專利權中所要求保護的任何具體發明的范圍、應用或用途。在“具體實施方案”末尾提供了意在幫助理解本發明的對術語和短語的非限制性討論。