[發明專利]一種快速定量檢測C-反應蛋白的免疫熒光試紙條組件、及其制成的檢測卡組件和制備方法

有效

• 申請號: 201210133569.6
• 申請日: 2012-04-28
• 公開（公告）號: CN102680702A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 羅琪;謝愛武;梁萬興
• 申請（專利權）人: 廣州鴻琪光學儀器科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/532;G01N21/64
• 代理公司: 廣州市越秀區海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 黃為

技術領域

本發明屬于醫學檢驗領域，尤其涉及一種快速定量檢測C-反應蛋白的免疫熒光試紙條組件及其制備方法，和由免疫熒光試紙條組件支撐的檢測卡組件及其制備方法。?

背景技術

C-反應蛋白(C-reactive?protein，CRP)是環狀五球體蛋白，屬于Oligomeric鈣結合蛋白，相對分子質量約120000，由5個相同的單體以非共價鍵構成，是炎性淋巴因子白介素-6、白介素-1，腫瘤壞死因子刺激肝臟上皮細胞合成的。由于C-反應蛋白在感染發生后6～8h即開始升高，24～48h達到高峰，高峰值可達正常的數百倍，在感染消除后其含量急驟下降，一周內可恢復正常。C-反應蛋白被公認為是最有價值的急性時相反應蛋白，它的升高可以提示許多炎癥事件的發生，因此，很久以來被廣泛應用于臨床感染性疾病的檢測。近年來有研究者發現，炎癥在動脈粥樣硬化的起始、形成、發展過程中扮演了重要的角色，所以C-反應蛋白這個極其靈敏的炎癥指標在各種類型心血管疾病中得到了廣泛的研究。?

常規C-反應蛋白檢驗方法可在感染或組織損傷時檢測出C-反應蛋白＞10mg/L，但是，不能很好地檢測出低水平(0.1～10mg/L)的C-反應蛋白變化。該水平的C-反應蛋白與心血管疾病的發生有著密切的關系，所以日益受到研究者的關注。隨著一些高靈敏度檢測方法的出現，低水平的C-反應蛋白也可以被檢測出來，由于應用的檢測方法具有較高的靈敏度，因此，這個水平的C反應蛋白又被稱為較高的超敏C反應蛋白(high?sensitivity?C-reactive?protein，hs-C-反應蛋白)。研究顯示，在無明顯癥狀的健康男性中，C-反應蛋白的升高程度與初次發生冠心病的危險性呈正相關，hs-C-反應蛋白濃度處于高值的那部分人群未來發生中風、心肌梗死、周圍血管疾病的危險分別是低值的2倍(RR＝1.9，95％CI?1.1～3.3)、3倍(RR＝2.9，95％)CI?1.8～6.0)和4倍(RR＝4.1，95％CI?1.2～6.0)，并且證實不受吸煙因素的影響而獨立于冠心病的其他危險因子之外。Hs-C-反應蛋白對于女性也是一個強有力的未來心血管發病的預測因子(RR＝4.4，95％CI?2.2～8.9)。hs-C-反應蛋白對于急性冠脈綜合征的診斷也有十分重要的作用。不穩定性心絞痛或非ST段抬高的心肌梗死患者有hs-C-反應蛋白升高、則示來可能會發生各種不利事件，如心絞痛的再發、ST段抬高的心肌梗死或冠心病引起的死亡。?

臨床實驗室C-反應蛋白檢測一直采用透射免疫和散射免疫方法，這些方法的參考值范圍變動很大，從3mg/L到超過200mg/L。隨著人們對于低水平C-反應蛋白與心血管疾病關系的?認識，這些測定方法的靈敏度遠遠不能滿足要求，而且目前的檢測方法即使使用昂貴的儀器設備和試劑，也不能同時兼顧高值和低值的檢測要求。因此，建立一種檢測時間短，并且檢測除了能在實驗室進行外，還要求能夠進行床旁檢測，同時對高值和低值C-反應蛋白都適用的檢測方法，從而為臨床提供準確的診斷依據，是十分必要的。?

目前，用來測量C-反應蛋白的免疫層析技術中所使用的標記物通常是酶、膠體金以及各種彩色微球標記物，這些標記物應用于免疫層析技術中有相同的特點：物理吸附方式標記和通過顏色判斷檢測結果。其中物理吸附方式標記(即疏水性和靜電吸附原理)的特點使得其容易形成非特異性干擾，需要在生產工藝配方中添加非特異性干擾消除試劑，如吐溫20等表面活性劑等，但使用這類試劑的同時，也容易造成基于這類標記物的假陽性或假陰性的結果。另外通過顏色判讀結果在使用時必然受觀察者主觀影響大，尤其是弱陽性結果，且只能做出定性判斷，而無法實現精確的定量判定。這些缺點大大限制了免疫層析技術在臨床檢測中的應用范圍。?

而中國公開第102087293號專利揭示了一種全程定量檢測C-反應蛋白的免疫層析試紙及其制備方法，其雖然采用了熒光定量技術，但沒有明確具體的熒光材料；同時，其將熒光乳膠微粒干燥固定在結合墊上，必定會影響其在玻璃纖維素膜上的溶解和釋放速度，也影響其在硝酸纖維素膜上的爬行速度，整個檢測時間也要遠超其要求的10秒測定時間。同時，被檢測物中的C-反應蛋白與熒光乳膠顆粒標記的C-反應蛋白抗體，以及硝酸纖維素膜上固定的C-反應蛋白抗體，在10秒鐘內難以形成有效的抗原-抗體反應，免疫學反應是不充分的，必將導致檢測靈敏度偏低，檢測線性范圍窄，難以滿足臨床檢測的需求。?