[發(fā)明專利]一種用于結核桿菌目視檢測引物組及其試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210133115.9
• 申請日: 2012-05-03
• 公開（公告）號: CN102776275A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發(fā)明（設計）人: 陳創(chuàng)夫;張輝;王勇;曹旭東;喬軍;張豫;孫志華
• 申請（專利權）人: 石河子大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/32
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及一種生物檢測試劑的研發(fā)，更具體涉及一種用于結核桿菌目視檢測引物組及其試劑盒，屬于分子生物學技術領域。。?

背景技術

結核病(Tuberculosis，TB)是由結核分枝桿菌(Mycobacterium?tuberculosis)引起的一種慢性人畜共患病，能夠感染人和多種哺乳動物以及禽類。其中導致人類感染的結核菌大多數是人結核分枝桿菌，也有10％以上是由牛分枝桿菌引起的。各個器官都可被侵犯，但以肺器官被侵染為多見。其病理特征是在多種組織器官中形成肉芽腫和干酪樣、鈣化結節(jié)病變。?

據世界衛(wèi)生組織(WHO)報告，目前全球已有20億人感染結核菌，現有活動性肺結核患者約2000萬，每年新發(fā)病800-1000萬，每年約有300萬人死于結核病，每年死于結核病的成年人多于艾滋病，瘧疾和熱帶病死亡人數的總和。據WHO估算，到2005年全球結核病新病例將達1020萬例。全球90％的結核病在發(fā)展中國家，中國結核病患者數居世界第二，僅次于印度。結核桿菌不僅感染人，也感染許多動物(見表1)尤其是奶牛。這對以奶牛業(yè)為主的發(fā)達國家造成嚴重經濟損失。盡管一些國家已有效地控制或消滅了此病，但在有些國家和地區(qū)仍呈地區(qū)性散發(fā)和流行。我國結核病疫情嚴重，且分布較廣。?

表1各種不同結核桿菌對人和動物的致病性?

結核病既是一個公共衛(wèi)生問題，也是一個社會經濟問題，對人類的公共健康構成很大威脅。因此對其快速診斷檢測就至關重要。目前結核病的診斷方法主要有細菌學檢測法、X射線檢測法、免疫學檢測法、分子生物學檢測法等。目前同類技術的狀況如下：?

(1)結核桿菌的細菌學檢測法又分為痰涂片檢測和痰結核菌培養(yǎng)檢測。?

①痰涂片檢測。優(yōu)點：檢查簡便易行，準確性較高，痰中查出結核菌，就能確診患了結核病。缺點：陽性率低。?

②痰結核菌培養(yǎng)檢測。優(yōu)點：結果可信度高，并能做結核菌藥敏試驗。缺點：耗時長，一般需耗時6-8周，應用受到限制。?

(2)X線檢測法?

X線檢測法的優(yōu)點：可以早期發(fā)現結核病并確定病灶的部位、性質、范圍，了解發(fā)病情況及用于治療效果的判斷，并且開展方便，病人樂于接受。缺點是較小的或隱蔽部位的病變較難發(fā)現，需要做胸部CT，彌補一般?X線檢查的不足。?

(3)結核桿菌的免疫學檢測法?

①結核菌素皮內檢測法(Tuberculin?skin?test，TST)。TST是世界動物衛(wèi)生組織(OIE)迄今為止唯一推薦的牛結核病的檢測方法。該方法主要是用結核菌素、純化蛋白衍生物(Purified?Protein?derivatives，PPD)對牛進行皮內接種，于72h-96h后觀察接種部位皮膚的腫脹程度，以確診牛結核病。該方法曾經在牛結核病的診斷與防治過程中發(fā)揮了重要作用，英國和歐共體的諸多國家就是利用該方法消滅和控制了牛結核病。該方法存在很多不足：由于純化蛋白衍生物(PPD)皮膚試驗個體差異較大，注射劑量和純化蛋白衍生物(PPD)批號對牛個體反應均有差異，會呈現不同的皮膚反應，其結果以皮膚厚度的增加數為準，易造成人為誤差，操作煩瑣，費時費力，缺乏嚴格性。結核菌素試驗陽性僅能表明在過去某一時間曾經發(fā)生過的一次結核菌感染，它無法證明目前的結核菌感染是否為活動的，或僅為在機體的某處有活的結核菌存在。當動物發(fā)生某些細菌或病毒的感染時，或者使用某些藥物治療及一些不明原因，也可能造成假陽性或假陰性結果。部分研究者還發(fā)現，該法存在著極強的非特異性，即在相當數量的結核菌素試驗陽性牛中，既找不出特征病變，又不能分離出結核菌，或僅僅分離出非典型的分枝桿菌，重復檢疫時陽性率下降，而且妊娠母牛和細胞免疫反應低下的重癥患牛檢出率均很低，使得該方法已成為基層檢疫中捕殺政策難以執(zhí)行及奶牛場難以凈化的直接原因。鑒于以上不足，因此有必要開展其他的輔助診斷，以更準確地判斷結核病的感染情況。?