[發(fā)明專利]生產(chǎn)3-羥基丙酸和4-羥基丁酸的共聚物的重組菌及其應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210132778.9
• 申請(qǐng)日: 2012-04-28
• 公開（公告）號(hào): CN102676567A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳國(guó)強(qiáng);孟德川;周琴;石振宇;吳瓊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 清華大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/70
• 分類號(hào): C12N15/70;C12N1/21;C12P7/62;C12R1/19
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;王慧鳳

1.產(chǎn)3-羥基丙酸和4-羥基丁酸的共聚物的重組菌的構(gòu)建方法，包括如下步驟：將1，3-丙二醇脫氫酶編碼基因、醛脫氫酶編碼基因、3-羥基丙酸輔酶A連接酶編碼基因、4-羥基丁酸輔酶A轉(zhuǎn)移酶編碼基因和PHA聚合酶編碼基因?qū)氤霭l(fā)菌，得到重組菌。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述1，3-丙二醇脫氫酶的氨基酸序列為序列表中序列8；所述醛脫氫酶的氨基酸序列為序列表中序列9；所述3-羥基丙酸輔酶A連接酶的氨基酸序列為序列表中序列10；所述PHA聚合酶的氨基酸序列為序列表中序列11；所述4-羥基丁酸輔酶A轉(zhuǎn)移酶的氨基酸序列為序列表中序列12。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述1，3-丙二醇脫氫酶基因的核苷酸序列為序列表中序列1；所述醛脫氫酶基因的核苷酸序列為序列表中序列2；所述3-羥基丙酸輔酶A連接酶編碼基因的核苷酸序列為序列表中序列3；所述PHA聚合酶編碼基因的核苷酸序列為序列表中序列4；所述4-羥基丁酸輔酶A轉(zhuǎn)移酶編碼基因的核苷酸序列為序列表中序列5；所述出發(fā)菌為大腸桿菌，優(yōu)選為Escherichia?coliS17-1。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的方法，其特征在于：

所述1，3-丙二醇脫氫酶編碼基因和所述醛脫氫酶編碼基因通過重組載體A導(dǎo)入所述出發(fā)菌中；

所述3-羥基丙酸輔酶A連接酶編碼基因、4-羥基丁酸輔酶A轉(zhuǎn)移酶編碼基因和所述PHA聚合酶編碼基因通過重組載體B導(dǎo)入所述出發(fā)菌中；

所述重組載體A為pZQ01；

所述重組載體B為將4-羥基丁酸輔酶A轉(zhuǎn)移酶的編碼基因插入到pZQ03的多克隆識(shí)別位點(diǎn)得到的重組載體。

5.由權(quán)利要求1-4中任一所述的方法構(gòu)建的重組菌。

6.一種生產(chǎn)3-羥基丙酸和4-羥基丁酸的共聚物的方法，包括如下步驟：將權(quán)利要求4所述的重組菌用添加了1，3-丙二醇和1，4-丁二醇的培養(yǎng)基培養(yǎng)，收集菌體，提取聚合物，即得到3-羥基丙酸和4-羥基丁酸的共聚物。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述培養(yǎng)溫度為30℃-40℃，優(yōu)選37℃；所述培養(yǎng)基的pH為6-8，優(yōu)選為7。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述培養(yǎng)基中的1，3-丙二醇或1，4-丁二醇含量均不高于20g/L；所述1，3-丙二醇、1，4-丁二醇在培養(yǎng)基中的濃度均優(yōu)選為1g/L-20g/L；所述培養(yǎng)時(shí)間為24-72小時(shí)，優(yōu)選48小時(shí)；所述培養(yǎng)基為大腸桿菌培養(yǎng)基，優(yōu)選為TB培養(yǎng)基，所述TB培養(yǎng)基含有24g/L酵母提取物，12g/L蛋白胨，4ml/L甘油，0.017mol/L?KH₂PO₄，0.072mol/L?K₂HPO₄。

9.一種產(chǎn)3-羥基丙酸和4-羥基丁酸的共聚物的重組載體組合，重組載體A和重組載體B組成；所述重組載體A為pZQ01；所述重組載體B為將4-羥基丁酸輔酶A轉(zhuǎn)移酶的編碼基因插入到pZQ03的多克隆識(shí)別位點(diǎn)得到的載體。

10.權(quán)利要求6-9中任意一項(xiàng)所述方法制備的3-羥基丙酸和4-羥基丁酸的共聚物。