[發(fā)明專利]一種雞繁殖性狀基因診斷試劑盒及其使用方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210131267.5
• 申請日: 2012-05-02
• 公開（公告）號: CN102676665A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設計）人: 黃華云;黎泰豐;趙振華;李春苗
• 申請（專利權）人: 江蘇省家禽科學研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 揚州市錦江專利事務所 32106
• 代理人: 江平

1.一種與雞繁殖性狀密切相關基因診斷試劑盒，其特征是：所述試劑盒包括GDF9基因PCR擴增的上下游引物混合物、PCR反應試劑和RFLP所需試劑；所述上下游引物混合物中上下游引物為：

GDF9上游引物序列??5'-CATACAATGGTGCAGAACATAATGTA-?3'；

GDF9下游引物序列??5'-ATTCTTTGTAGACTATGGAGCCATC-3'。

2.根據(jù)權利要求1所述的雞繁殖性狀密切相關基因診斷試劑盒，其特征是：所述PCR反應試劑為10×buffer，dNTP，rTaq酶。

3.根據(jù)權利要求1所述的雞繁殖性狀密切相關基因診斷試劑盒，其特征是：所述RFLP所需試劑為10×buffer，TaqⅠ內(nèi)切酶。

4.一種使用權利要求1所述診斷試劑盒的方法，其特征是包括下列步驟：

1）PCR擴增SNP位點所在片段；

2）PCR產(chǎn)物的RFLP分型鑒定。

5.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征是：所述的PCR擴增SNP位點所在片段包括以下步驟：

1）PCR擴增反應體系準備：在PCR反應管中加入10×PCR緩沖液2.5?μL、10?μmol/L上下游引物混合物2.0?μL、2?mmol/L?dNTPs?2.0?μL、5?U/μL?Taq?DNA聚合酶0.5?μL和50?ng/μL?DNA模板1.0?μL，加超純水至25?μL，充分混勻后短暫離心；

2）將PCR反應管放入PCR儀進行反應擴增：先94℃?變性5min；再經(jīng)過35個循環(huán)，每個循環(huán)包括94℃30s、63℃?15s、72℃?30s；然后72℃?延伸10?min、最后4℃保存。

6.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征是：所述的PCR產(chǎn)物的RFLP分型鑒定有以下步驟：

1）在PCR薄壁管中加入8.5μl?PCR產(chǎn)物、2ul?10×buffer（內(nèi)切酶配套）、內(nèi)切酶?(TaqⅠ)?0.5ul和超純水9?μl，充分混勻后短暫離心，然后放入37℃水浴鍋中水浴6小時；

2）RFLP鑒定，酶切產(chǎn)物在3%瓊脂糖凝膠，1×TBE，120?V電泳40分鐘，用凝膠電泳成像系統(tǒng)顯像。

7.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征是：在PCR擴增反應結(jié)束后，取4μl反應產(chǎn)物在1.5％瓊脂糖膠，1×TBE中電泳，檢測擴增產(chǎn)物片段大小，以擴增產(chǎn)物片段為133?bp，判定PCR擴增片段是否正確。