[發明專利]肝細胞生長因子在制備治療多發性硬化癥的藥物中的應用

無效

• 申請號: 201210130274.3
• 申請日: 2012-04-28
• 公開（公告）號: CN102716467A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 白蓮花
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學第一附屬醫院
• 主分類號: A61K38/18
• 分類號: A61K38/18;A61P25/00
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

技術領域

本發明屬于醫藥領域，涉及肝細胞生長因子在制藥領域中的新用途。

背景技術

多發性硬化癥（multiple?sclerosis,?MS）是一種中樞神經系統脫髓鞘疾病，主要危害風華正茂和年富力強的青、中年人群（20-50歲）。全球有超過2,500,000名MS患者，我國MS患者在2004年約65,000例，近幾年呈較快增長趨勢。MS的確切病因至今未明，目前認為與自身免疫相關，其臨床表現為極度疲勞、復視、性功能喪失、肢體麻木、行走困難、癱瘓等，與其它神經疾病的最大區別在于最初臨床癥狀反復“復發-緩解”，頻繁促進更多的功能喪失。目前醫學上對MS尚無根治手段，能夠延緩MS進展的大多數治療藥品均依賴進口，價格昂貴且沒有被醫療保險所覆蓋，從而導致我國MS患者的發病率雖然低于歐美國家，但致殘率卻高于歐美國家。因此，研究開發高效、安全且有自主知識產權的MS治療藥物，具有重要意義。

當前治療MS的多數方法都是直接抑制免疫反應，但長效的功能恢復很可能取決于中樞神經系統自身的恢復能力，包括更換丟失的少突膠質細胞及修復疾病所致的髓鞘損壞等。最近的研究表明，干細胞療法是很有發展前途的治療脫髓鞘疾病例如MS的方法，其提供了促進髓鞘有效再生，并在病程中協同免疫攻擊調節的可能性。骨髓間充質干細胞（Mesenchymal?stem?cell,?MSC）因治療有效、易于獲取、易于擴增以及含有豐富的營養因子等已被用于一系列神經損傷疾病的治療。實驗性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）是公認的研究人類MS的動物模型。既往研究表明，MSC在EAE模型中可以促進疾病功能改善，減少病變負荷，但其作用機制尚不清楚。

肝細胞生長因子（HGF）是一種由細胞間質起源的多效細胞因子，最初被稱為肝細胞的主要促分裂原，隨后被確定存在于多個組織包括中樞神經系統中。在中樞神經系統中，HGF表達于發育過程中，也作為神經營養因子表達于成人。既往研究顯示，HGF可以促進血管生成和細胞存活，能夠提高腎臟和肝臟再生以及防止腎功能衰竭，還能延長心臟移植的存活率和改善心肌梗塞后心肌的功能。但目前關于HGF與MS之間的關系尚未見文獻報道。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于闡明MSC促進EAE模型疾病功能改善的作用機制以及HGF在其中所起的作用，進而考察HGF是否能夠用于制備MS治療藥物。

研究結果顯示，在髓鞘少突膠質細胞糖蛋白35-55多肽片段（MOG35-55）誘導的MS動物模型EAE中，給予含有人MSC旁分泌物質的條件培養液（MSC-CM）能夠降低EAE功能缺陷，并在功能性細胞損傷時促進少突膠質細胞和神經元的發育，其中發揮主要作用的是MSC釋放的HGF；單獨給予HGF的作用與MSC-CM相似，同樣可以刺激少突膠質細胞和神經元的發育及遷移，增強髓鞘修復能力，減少MS動物模型EAE的病變負荷，促進疾病功能恢復，且給予EAE模型短暫的HGF治療即能持續地引導疾病功能改善。因此，HGF及含有HGF的MSC-CM都可以用于制備治療MS（包括EAE）的藥物，用于MS的臨床治療。

本發明的有益效果在于：本發明提供了HGF和含有HGF的MSC-CM在制備治療MS的藥物中的應用，不僅拓寬了HGF和MSC-CM的應用范圍，而且為MS的臨床治療提供了一種有效藥物，同時有助于新型高效MS治療藥物的進一步深入開發。

附圖說明

為了使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將結合附圖對本發明作進一步的詳細描述，其中：

圖1為神經干細胞分別在對照培養基（control）和MSC-CM中的培養分化情況，其中A為不同培養條件下各種神經細胞的免疫熒光染色分析圖，B為不同培養條件下各種神經細胞占細胞總數的比例分析圖。

圖2為分別給予PBS和MSC-CM治療的EAE模型小鼠的臨床評分比較，圖中箭頭表示MSC-CM的首次給藥日。

圖3為分別給予PBS和MSC-CM治療的EAE模型小鼠的脊髓切片觀察（LFB染色）。

圖4為各種神經細胞分別在MSC-CM_10kD、MSC-CM_30kD、MSC-CM_50kD和MSC-CM_100kD中的培養和從神經干細胞分化情況。