[發(fā)明專(zhuān)利]一種檢測(cè)或輔助檢測(cè)放射性肺纖維化的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210129683.1
• 申請(qǐng)日: 2012-04-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103376228A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 潘秀頡;朱茂祥;楊陟華;熊珊珊;李若曦;杜麗
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): G01N15/10
• 分類(lèi)號(hào): G01N15/10;G01N33/68
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測(cè)或輔助檢測(cè)放射性肺纖維化的試劑盒。

背景技術(shù)

肺纖維化是一種以彌漫性肺炎和肺泡結(jié)構(gòu)紊亂并導(dǎo)致肺間質(zhì)纖維化為特征的疾病。放射性肺纖維化(Radiation?pulmonary?fibrosis，RPF)是臨床胸部腫瘤放療、骨髓移植預(yù)處理及急性放射病最常見(jiàn)的并發(fā)癥之一，已成為目前放射醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，肺部受照后，原位的成纖維細(xì)胞增殖和肺泡上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化為間質(zhì)細(xì)胞是纖維化形成的關(guān)鍵。然而對(duì)于博萊霉素、病毒等誘導(dǎo)的肺纖維化的研究發(fā)現(xiàn)，一種來(lái)源于骨髓、游走于外周血、具有分化能力的細(xì)胞——纖維細(xì)胞(Fibrocytes，也可以稱(chēng)為纖維干細(xì)胞)對(duì)受損肺組織的過(guò)度修復(fù)是上述肺纖維化發(fā)病的重要機(jī)制之一。電離輻射屬于物理?yè)p傷，在引起肺纖維化過(guò)程中與化學(xué)及生物因素的作用具有較大差異。

纖維細(xì)胞是一種游走于外周血的骨髓來(lái)源的干細(xì)胞，在多種類(lèi)型的纖維化中起重要作用，該細(xì)胞表達(dá)多種趨化因子受體，分泌細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，可分化為成纖維細(xì)胞、肌成纖維細(xì)胞、脂細(xì)胞等其他間質(zhì)細(xì)胞。I型膠原(collagen?I，Col?I)、CD34及CD45等是纖維細(xì)胞的特征性標(biāo)志物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種檢測(cè)或輔助檢測(cè)放射性肺纖維化的試劑盒。

本發(fā)明提供的試劑盒，包括用于檢測(cè)纖維細(xì)胞的數(shù)量的裝置和用于檢測(cè)纖維細(xì)胞的數(shù)量的試劑。

上述試劑盒還包括用于檢測(cè)趨化因子含量的試劑盒和用于檢測(cè)趨化因子含量的裝置；

所述趨化因子具體為單核細(xì)胞趨化蛋白-1(CCL2/MCP-1)和/或巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1α(CCL3/MIP-1α)。

上述試劑盒中，所述用于檢測(cè)纖維細(xì)胞的數(shù)量的裝置為流式細(xì)胞儀；

所述用于檢測(cè)纖維細(xì)胞的數(shù)量的試劑為如下1)-3)中任一一種：

1)熒光標(biāo)記物1標(biāo)記的抗CD45抗體、熒光標(biāo)記物2標(biāo)記的抗I型膠原蛋白抗體和IV型膠原酶；

2)熒光標(biāo)記物1標(biāo)記的抗CD45抗體、抗I型膠原蛋白(collagen?I，Col?I)抗體和熒光標(biāo)記物2標(biāo)記的抗I型膠原蛋白抗體的二抗和IV型膠原酶；

3)熒光標(biāo)記物1標(biāo)記的抗CD45抗體、抗I型膠原蛋白抗體、熒光標(biāo)記物2標(biāo)記的抗CD45抗體的二抗和IV型膠原酶。

所述用于檢測(cè)趨化因子含量的試劑盒為細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒；所述用于檢測(cè)趨化因子含量的試劑盒具體為小鼠細(xì)胞因子液相懸浮芯片檢測(cè)試劑盒；

所述用于檢測(cè)趨化因子含量的裝置為液相懸浮芯片儀。

IV型膠原酶的酶量為200U/mg，酶活定義為在37℃，Ph7.5條件下作用于天然膠原蛋白，以每小時(shí)從膠原蛋白中釋放的多肽相當(dāng)于茚三酮顯色1微摩爾亮氨酸量為一個(gè)活性單位(U)。

所述用于檢測(cè)趨化因子含量的裝置為液相懸浮芯片儀。

上述試劑盒中，所述熒光標(biāo)記物1和所述熒光標(biāo)記物2為不同的熒光標(biāo)記物；

所述熒光標(biāo)記物1或所述熒光標(biāo)記物2具體均為APC和FITC中的任意一種，且二者不同。

上述試劑盒中，所述抗CD45抗體為抗小鼠CD45抗體；

所述抗I型膠原蛋白抗體為抗小鼠I型膠原蛋白抗體。

上述試劑盒中，所述用于檢測(cè)纖維細(xì)胞的數(shù)量的試劑為APC標(biāo)記抗小鼠CD45抗體、抗小鼠I型膠原蛋白抗體、FITC標(biāo)記抗抗小鼠I型膠原蛋白抗體的二抗和IV型膠原酶。

上述試劑盒中，所述APC標(biāo)記抗小鼠CD45抗體為APC標(biāo)記大鼠抗小鼠CD45抗體；

所述抗小鼠I型膠原蛋白抗體為兔抗小鼠I型膠原蛋白抗體；

所述FITC標(biāo)記抗小鼠I型膠原蛋白抗體為FITC標(biāo)記兔抗小鼠I型膠原蛋白抗體的二抗。

上述的試劑盒在制備檢測(cè)或輔助檢測(cè)放射性肺纖維化的產(chǎn)品中的應(yīng)用也是本發(fā)明保護(hù)的范圍。

本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明提供的試劑盒，可以通過(guò)檢測(cè)纖維細(xì)胞的數(shù)量、CCL2/MCP-1和CCL3/MIP-1α的含量來(lái)檢測(cè)小鼠是否為放射性肺纖維化，其檢測(cè)方法簡(jiǎn)單，可用來(lái)檢測(cè)或輔助檢測(cè)待測(cè)樣本是否為放射性肺纖維化，為放射性肺纖維化的診斷提供了新的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，為該疾病的機(jī)制及防治提供新的線(xiàn)索。

附圖說(shuō)明

圖1為小鼠胸部照射后肺HE染色(400)

圖2為小鼠胸部照射后肺三色染色(400)

圖3為小鼠胸部照射后肺實(shí)質(zhì)中纖維細(xì)胞改變

圖4為小鼠胸部照射后肺灌洗液中趨化因子改變

具體實(shí)施方式