[發明專利]細胞培養法生產人參皂甙及多糖的方法

無效

• 申請號: 201210127745.5
• 申請日: 2012-04-27
• 公開（公告）號: CN102634477A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 高國文;李成林
• 申請（專利權）人: 江西中天醫藥生物有限公司
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;C07J17/00;C08B37/00
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 謝德珍

1.細胞培養法生產人參皂甙及多糖的方法，其特征在于，是一種利用多年生人參的根細胞培養，利用酶技術縮短細胞培養周期，來生產人參皂甙及多糖的方法，具體流程為：

（1）種子細胞采集：

①取新鮮的多年生人參的根清洗消毒，將洗凈的人參塊根用10-20%次氯酸鈉溶液浸泡10-30分鐘，用無菌水清洗塊根至次氯酸鈉無殘留；

②將清潔后的塊根放入打漿機加入MS培養基，每1.5g加入10ml，打漿；

③將打漿液加入纖維素酶100mg/kg，放置3-5小時，用50-80微米孔徑的微孔濾器過濾，濾液用低速離心機分離，去雜質及上清液收集種子細胞；

（2）種子細胞培養：

①將收集到的種子細胞接種到含改良MS培養基的種子罐中，接種量為10-20g/L，調pH?5-6，溫度20-25℃；

②搖床或震蕩種子罐培養20-30小時，計算細胞數量20000-40000個/ml，即可擴大培養；

（3）細胞擴大培養：

①將培養好的種子細胞接種于有機械攪拌的生物反應器內，懸浮培養，培養基用改良的MS培養基，接種量為15-25g/L，攪拌速率90-120r/min，pH?5-6，通入過濾空氣，速率0.01-0.05m3/s；

②加入生長素2,4-D?0.5-1mg/L，果膠酶50-80mg/L，暗培養20-25天，細胞計數35000-50000/ml即停止培養；

（4）采用離心或其他方法收集人參植物細胞，即可用常規方法提取人參皂甙及多糖。