[發明專利]用于重組雞α干擾素包涵體的復性液及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201210127204.2
• 申請日: 2012-04-27
• 公開（公告）號: CN102633875A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 高應瑞
• 申請（專利權）人: 天津生機集團股份有限公司
• 主分類號: C07K14/56
• 分類號: C07K14/56;C07K1/14
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司 12107
• 代理人: 李蕊

1.一種用于重組雞α干擾素包涵體的復性液，其特征在于：主要由精氨酸、EDTA、氧化型谷胱甘肽、Tris和甘油組成，其中各組分濃度分別為：0.2～0.8M精氨酸、0.5～2mM?EDTA、0.3～0.9mM氧化型谷胱甘肽、60～100mM?Tris、甘油含量15～30％(v/v)。

2.根據權利要求1所述的用于重組雞α干擾素包涵體的復性液，其特征在于：所述復性液pH為8.0～8.5。

3.根據權利要求1或2所述的用于重組雞α干擾素包涵體的復性液，其特征在于：其中各組分濃度分別為：0.4～0.6M精氨酸、0.5～1.5mM?EDTA、0.5～0.8mM氧化型谷胱甘肽、70～85mM?Tris、甘油含量15～25％(v/v)，復性液pH為8.0～8.3。

4.根據權利要求1或2所述的用于重組雞α干擾素包涵體的復性液，其特征在于：其中各組分濃度分別為：0.2M精氨酸、0.5mM?EDTA、0.3mM氧化型谷胱甘肽、60mM?Tris、甘油含量15％(v/v)，復性液pH為8.0。

5.根據權利要求3所述的用于重組雞α干擾素包涵體的復性液，其特征在于：其中各組分濃度分別為：0.5M精氨酸、1.5mM?EDTA、0.6mM氧化型谷胱甘肽、75mM?Tris、甘油含量20％(v/v)，復性液pH為8.2。

6.權利要求1-5之一所述的用于重組雞α干擾素包涵體的復性液的制備方法，其特征在于：具體制備步驟如下：

(1)按上述各組分比例關系準確稱取各組分；

(2)將各組分在蒸餾水中充分溶解；

(3)用HCl調節pH值。

7.權利要求1-5之一所述的用于重組雞α干擾素包涵體的復性液在重組雞α干擾素包涵體方面的應用，其特征在于：具體方法步驟為：

(1)提取包涵體蛋白：離心收集菌體，并將菌體超聲破碎后高速冷凍離心，得到雞α干擾素包涵體蛋白質；

(2)純化包涵體蛋白質：首先按質量體積比1∶10～1∶40將包涵體重懸于第一洗滌液中高速冷凍離心；然后按質量體積比1∶10～1∶40將包涵體重懸于第二洗滌液中高速冷凍離心；最后按質量體積比1∶20～1∶50將包涵體重懸于第三洗滌液中高速冷凍離心，所述第一洗滌液的組分配比為NaCl137mmol/L、KCl?2.7mmo?l/L、Na₂HPO₄?10mmol/L、KH₂PO₄?2mmol/L、0.2％～1.4％的tritonX-100、pH?8.0～8.5；第二洗滌液為1～3mol/L尿素；第三洗滌液為0.6～2mol/L?NaCl；

(3)溶解與復性包涵體蛋白質：按質量體積比為1∶10～1∶50將步驟(2)離心后所得沉淀用變性劑重懸，室溫放置至沉淀逐漸溶解后高速冷凍離心，收集上清液；1-10℃條件下，使上清液逐滴加入到本發明所述復性液中，體積比為1∶50～1∶100，同時攪拌12～24h，所述變性劑的組分配比為每5～7M鹽酸胍中1～2mM?EDTA、20～50mM?Tris、6～10mM?DTT、pH?8.0～8.5。

8.根據權利要求7所述的用于重組雞α干擾素包涵體的復性液在重組雞α干擾素包涵體方面的應用，其特征在于：所述步驟(1)中離心收集菌體條件為4℃、4000～6000rpm/min、10～20min，將菌體超聲破碎條件為功率400瓦、工作3秒、間歇7秒、工作時間15～30分鐘，高速冷凍離心條件為4℃、8000～10000rpm/min、10～20min；步驟(2)中包涵體重懸于第一洗滌液、第二洗滌液和第三洗滌液后高速冷凍離心的條件均為4℃、8000～10000rpm/min、10～20min；步驟(3)中高速冷凍離心條件為4℃、8000～10000rpm/min、10～20min，同時4℃條件下使上清液逐滴加入到本發明所述復性液中。

9.根據權利要求7或8所述的用于重組雞α干擾素包涵體的復性液在重組雞α干擾素包涵體方面的應用，其特征在于：所述步驟(1)中菌體為大腸桿菌。

10.根據權利要求7所述的用于重組雞α干擾素包涵體的復性液在重組雞α干擾素包涵體方面的應用，其特征在于：所述步驟(3)中變性劑的組分配比為每6M鹽酸胍中1.5mM?EDTA、30～40mM?Tris、8mM?DTT、pH?8.5。